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目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)常见的微血管并发症之一,也是糖尿病患者致残、致死的重要原因。本研究旨在观察化瘀通络中药及其拆方对DN大鼠的干预作用及对裂孔膜蛋白Nephrin、NEPH1水平的影响,探讨其可能的作用机制,并比较化瘀通络中药及其拆方的作用差别,为临床防治DN提供实验依据。方法:健康雄性SD大鼠80只,体重100g±10g,适应性喂养1周后,随机分为正常对照组(C组)10只,造模组70只。C组大鼠予普通饲料喂养,造模组大鼠予高糖高脂饲料喂养。4周后,造模组大鼠予链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液(35mg/kg)腹腔注射,C组注射相应体积枸橼酸缓冲液。72小时后随机血糖≥16.7mmol/L为DM造模成功。将成模大鼠随机分为模型组(M组)、化瘀通络组(Q组)、化瘀组(H组)、通络组(T组)、厄贝沙坦组(I组)。各治疗组分别给予相应药物灌胃,C组、M组灌服相应体积蒸馏水,连续干预16周。于16周末收集24小时尿液,检测24小时尿蛋白定量;麻醉状态下腹主动脉取血检测血液指标;留取肾组织,应用光镜、电镜观察大鼠肾脏病理改变;采用免疫组化、Western Blot、Real-time PCR方法检测足细胞裂孔膜蛋白Nephrin、NEPH1的表达水平。结果:1实验大鼠的一般情况C组大鼠一般情况良好;与C组比较,造模大鼠逐渐出现多食、多饮、多尿及体重减轻表现,其中以M组尤甚,各给药组大鼠在治疗过程中诸症均有不同程度缓解。2肾重、体重及肾脏肥大指数大鼠肾重各组间无统计学差异(P>0.05)。与C组相比,M组大鼠体重减轻,肾脏肥大指数升高,有统计学差异(P<0.05);与M组比较,各治疗组体重、肾脏肥大指数无统计学差异(P>0.05)。3 24小时尿蛋白定量(24h UTP)与C组比较,M组大鼠24h UTP明显增多(P<0.01);与M组比较,各治疗组24h UTP明显减少(P<0.01);各治疗组相比,Q组与I组比较24h UTP无明显差异(P>0.05),Q组24h UTP少于H、T组(P<0.05)。4空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)与C组比较,造模各组FBG均明显升高(P<0.01);造模各组间FBG无统计学差异(P>0.05)。与C组比较,M组大鼠TC、TG均明显升高(P<0.01);各治疗组大鼠较M组,TC、TG明显降低(P<0.01);各治疗组比较,TC无统计学差异(P>0.05),Q组TG少于H、T、I组(P<0.05)。5总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血肌酐(Scr)大鼠TP、ALB水平组间无明显差异(P>0.05)。与C组比较,M组大鼠Scr水平明显升高(P<0.05);与M组比较,Q组Scr水平下降(P<0.05),I、H、T组与M组比较无差异(P>0.05)。6血浆凝血酶原时间(PT)与C组比较,M组PT明显降低(P<0.05);与M组比较,Q组PT显著延长(P<0.05),I、H、T组与M组比较无差异(P>0.05)。7肾脏病理形态学观察7.1光镜观察C组大鼠肾小球结构正常;M组大鼠肾小球肥大,部分肾小囊腔变窄,系膜基质增多,基底膜增厚;与M组相比,各治疗组病理改变明显减轻,H组病理表现略重于其它治疗组。7.2电镜观察C组大鼠肾小球超微结构基本正常;M组大鼠肾小球基底膜均质性增厚,系膜基质增多,足突融合;与M组比较,各治疗组病理改变明显减轻,H组病理表现略重于其它治疗组。8免疫组织化学法检测肾组织Nephrin、NEPH1的表达结果显示:Nephrin、NEPH1两种蛋白主要表达于肾小球。与C组相比,各造模组大鼠Nephrin、NEPH1表达减少;与M组相比,各治疗组Nephrin、NEPH1表达增多。9 Western Blot检测肾组织Nephrin、NEPH1的表达与C组比较,M组大鼠Nephrin、NEPH1蛋白表达均明显下降(P<0.01);与M组比较,Q、I、T组Nephrin、NEPH1蛋白表达增加(P<0.05),H组与M组相比无明显差异(P>0.05);各治疗组相比,NEPH1蛋白表达未见明显差异,Q组Nephrin蛋白表达高于H、T、I组(P<0.05)。10 Real-time PCR检测肾组织Nephrin、NEPH1 m RNA的表达与C组比较,M组大鼠Nephrin、NEPH1m RNA表达明显下降(P<0.01);与M组比较,各治疗组Nephrin、NEPH1m RNA表达增加(P<0.05);各治疗组相比,NEPH1 m RNA表达未见明显差异,Q、T、I组Nephrin m RNA表达量较高,与H组有统计学差异(P<0.05)。结论:1化瘀通络中药可以改善DN大鼠一般情况、减少尿蛋白、降低DN大鼠总胆固醇及甘油三酯水平、降低血肌酐、延长凝血酶原时间、减轻DN肾脏病理损伤,具有肾保护作用。2化瘀通络中药可能通过上调Nephrin、NEPH1表达水平,而部分修复足细胞,减少尿蛋白,发挥肾保护作用。3裂孔膜蛋白Nephrin与NEPH1在糖尿病肾病大鼠肾组织内同步表达,提示二者在结构与功能上存在某种密切联系。4化瘀通络中药全方配伍合理,效果最佳;拆方比较,化瘀中药与通络中药在DN保护作用方面可能存在协同作用,且通络中药效果优于化瘀中药。