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目的:邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)是邻苯二甲酸酯类(Phthalates,PAEs)中较为常见的一种,被大量应用于医疗设备、食品包装等方面,可增加塑料制品弹性以及可塑性。研究表明孕哺期母体接触DEHP可影响儿童脑发育,导致儿童学习和记忆能力减弱甚至出现注意力缺陷,智力下降。树突棘密度和形态可反映树突棘功能。树突棘功能受损可影响学习和记忆能力。目前,母体孕哺期DEHP暴露如何仔鼠海马CA1区锥体神经元树突棘发育尚不清楚,其相关机制尚待研究。本研究旨通过建立孕期和哺乳期母鼠DEHP暴露模型,探索孕哺期母体DEHP暴露是否影响仔鼠海马CA1区锥体神经元树突棘发育。实验方法:将Wistar孕鼠随机分为四个剂量组:0、30、300和750 mg/kg/day组,每组以相应剂量的DEHP玉米油溶液进行灌胃给药。于仔鼠PN7、PN14和PN21时,采用Golgi-Cox染色实验,评估仔鼠海马CA1区的锥体神经元树突棘发育情况;采用超速离心法分离G-actin与F-actin,分析G-actin/F-actin比值;采用western blot法检测海马树突棘发育相关蛋白表达;并采用pull-down法检测Rac1蛋白活性。结果:1、通过对仔鼠海马CA1区锥体神经元树突棘Golgi-Cox染色显示,在雄性仔鼠中,各个时间点,与对照组相比,300 mg/kg/day组和750 mg/kg/day组海马CA1区锥体神经元树突棘密度显著降低(P<0.05);与对照组相比,30mg/kg/day组海马CA1区锥体神经元树突棘密度只在PN21时显著降低(P<0.05);与30 mg/kg/day组相比,300 mg/kg/day组和750 mg/kg/day组海马CA1区锥体神经元树突棘密度显著降低(P<0.05);与300 mg/kg/day组相比,750 mg/kg/day组海马CA1区锥体神经元树突棘密度在PN14与PN21显著降低(P<0.05)。在雌性仔鼠中,各个时间点,各暴露组海马CA1区锥体神经元树突棘密度均无显著性改变(P>0.05)。神经元树突棘形态统计分析显示,在雄性仔鼠海马中,细长型棘比例相对增长,蘑菇型棘比例相对减少,短粗型棘和分叉型棘无明显变化,树突棘形态无显著差异(P>0.05)。雌性仔鼠海马树突棘各形态变化均无显著差异(P>0.05)。2、通过超速离心法对仔鼠海马细胞骨架蛋白表达量检测显示,在雄性仔鼠中,各个时间点,与对照组相比,300 mg/kg/day组和750 mg/kg/day组海马组织中G-actin/F-actin比值升高,除PN21时300 mg/kg/day组升高不显著,其余均具有统计学意义(P<0.05);与30 mg/kg/day组相比,750 mg/kg/day组海马组织中G-actin/F-actin比值显著升高(P<0.05);在雌性仔鼠中,各个时间点,各暴露组海马组织中G-actin/F-actin比值差异均无显著性变化(P>0.05)。3、通过western blot实验对仔鼠海马树突棘相关发育相关蛋白检测显示,在雄性仔鼠海马中,各时间点,cofilin、LIMK1、PAK1/2/3蛋白表达水平均无显著性变化(P>0.05),与对照组相比,300 mg/kg/day组和750 mg/kg/day组仔鼠海马中p-cofilin、p-LIMK1、p-PAK1/2/3、drebrin蛋白表达水平显著性减少(P<0.05);与30 mg/kg/day组相比,750 mg/kg/day组仔鼠海马中p-cofilin、p-LIMK1、p-PAK1/2/3、drebrin蛋白表达水平减少,除p-cofilin在PN21、p-PAK1/2/3在PN14下降不显著,其余均具有统计学意义(P<0.05)。在雌性仔鼠中,各个时间点,各暴露组海马组织中树突棘发育相关蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。4、采用western blot实验法检测Rac1蛋白活性显示,各个时间点,各暴露组海马组织中Rac1蛋白表达无显著性变化(P>0.05)。在雄性仔鼠中,各个时间点,与对照组相比,300 mg/kg/day组和750 mg/kg/day组海马组织中GTP-Rac1表达量显著下降(P<0.05);与30 mg/kg/day组相比,750 mg/kg/day组海马组织中GTP-Rac1表达量显著下降(P<0.05)。在雌性仔鼠中,各暴露组仔鼠海马组织中GTP-Rac1表达水平与Rac1一致,差异均无显著性改变(P>0.05)。结论:1、孕哺期DEHP暴露损伤雄性仔鼠海马CA1区锥体神经元树突棘发育。2、孕哺期DEHP暴露导致雄性仔鼠海马CA1区锥体神经元树突棘密度下降,其可能机制是影响海马PAK/LIMK1/cofilin信号通路相关蛋白的表达,干扰细胞骨架肌动蛋白的构建。