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目的:构建纳米活性炭-吡柔比星(ACNP-THP)复合物,研究ACNP在体外对膀胱癌细胞株BIU-87增值的影响。方法:在超声碎化的条件下活化纳米活性炭,吡柔比星分子。将氨基和羧酸基团分别结合在纳米活性炭和吡柔比星分子一端。在相同条件下将两者结合。结果:成功构建ACNP-THP复合物,ACNP在体外对膀胱癌细胞株BIU-87基本没有毒性。结论:成功构建ACNP-THP复合物,ACNP在体外对膀胱癌细胞株BIU-87基本没有毒性。第二部分MNU构建原位膀胱癌及其相关机制目的: MNU(N-甲基-N-亚硝基脲)构建原位膀胱癌,并探讨MNU致癌的机制。方法:60只SD大鼠随机分成实验组50只和对照组10只。实验组用MNU 2mg/次,膀胱内灌注,2周一次,共4次。对照组生理盐水0.2ml/次,膀胱内灌注,每2周一次,共4次。第9周处死大鼠,随即取大鼠膀胱放入-80℃液氮中保存。采用免疫组化检测H-Ras蛋白的表达,RT-PCR检测磷脂酶C-ε(PLCε)mRNA的表达。结果:实验组50只SD大鼠成瘤36只,4只大鼠死亡,成瘤率为81.82%(36/46)。对照组10只大鼠膀胱内未见明显变化。免疫组化检测实验组36只成瘤大鼠中32只H-Ras蛋白阳性。对照组大鼠膀胱粘膜H-Ras蛋白表达阴性。用RT-PCR法检测实验组大鼠膀胱肿瘤和对照组大鼠膀胱粘膜PLCε的表达。实验组36只成瘤大鼠PLCε阳性。对照组10只大鼠膀胱粘膜PLCε表达阴性。结论:MNU可诱导大鼠膀胱粘膜发生癌变,其机制可能与H-Ras基因突变过表达,同时引起PLCεmRNA表达增加有关。第三部分ACNP-THP对大鼠膀胱癌体内外杀伤效应研究目的:观察纳米活性炭-吡柔比星复合物对大鼠膀胱肿瘤的体内外杀伤效应。方法:体外实验:膀胱癌细胞株BIU-87,培养在六孔板内,分别加入ACNP, saline,THP(0.5mg/ml),ACNP-THP(0.5mg/ml)各20ul。用流式细胞术检测细胞的生长抑制情况。体内实验:用MNU构建大鼠原位膀胱癌模型,将构建好的大鼠膀胱癌模型60只,随机分为三组,ACNP组,THP组和ACNP-THP组。每组20只。于建模成功后1天,向大鼠膀胱内灌注ACNP-THP(0.5mg/ml),THP(0.5mg/ml),ACNP。每周1次,共4次。分别于首次灌注后1小时, 1月后取大鼠膀胱。观察膀胱癌的生长情况。结果:体外实验结果显示ACNP、saline不影响膀胱癌细胞株BIU-87的生长和增值(p>0.05),吡柔比星组对膀胱癌细胞株BIU-87具有较强的增殖抑制效应,而ACNP-THP组对膀胱癌细胞株BIU-87具有更强的杀伤效应(p<0.01)。体内实验发现:灌注后1小时,ACNP-THP灌注组和THP组肿瘤细胞死亡率明显高于ACNP组和saline组,ACNP-THP组肿瘤细胞死亡率显著高于THP组(p<0.01), ACNP组和saline灌注组肿瘤细胞死亡率无明显区别(p>0.05)。灌注后1月,纳米活性炭-吡柔比星复合物能瘤体体积(平均11.4 mm3)比较THP组(平均18.3mm3)减小,差别具有统计学意义。同时增加肿瘤组织的坏死。单纯纳米活性炭对于膀胱肿瘤没有明显的抑制作用。结论:纳米活性炭吡柔比星复合物能够在体内外增强吡柔比星对膀胱癌的杀伤抑制作用。同时单纯纳米活性炭在体内外对于肿瘤的生长没有影响。