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【目的】胰腺癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,其发病率逐年升高,虽然医疗技术不断地进步,但是目前针对胰腺癌的治疗方案很不理想,总体5年生存率仅有5%左右。胰腺癌的发病机制尚未明确是其根本原因之一,在分子水平研究胰腺癌的发病机制及进展机理显得尤为重要。目前的研究表明微小RNA密切参与肿瘤的各种生理病理过程,研究发现miR-141在肿瘤疾病中显示出双重作用,即表达升高发挥抑癌作用和表达降低发挥促癌作用,具有成为抗肿瘤治疗靶点的潜力。四次跨膜蛋白(TM4SF1)则调节了胰腺癌的生长、迁移,在胰腺癌中TM4SF1表达上调。本研究通过探讨miR-141及TM4SF1在胰腺癌上皮间质转化及血管生成的通路机制研究,进一步阐明了胰腺癌的发生、血管生成与肿瘤转移的机制,为胰腺癌的治疗及预后提供新的理论依据。【方法】本课题分三部分研究,包括临床标本及病例资料收集并进行术后随访,胰腺癌细胞实验,裸鼠血管生成实验三部分。1、收集我院90例胰腺癌患者的组织标本进行免疫组化和q RT-PCR分析,对照GEO数据库分析其miR-141和TM4SF1的表达水平,对TM4SF1和miR-141的表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系进行统计分析。2、胰腺癌细胞系用于体外试验,培养不同种类的胰腺癌细胞进行Western和q RT-PCR分析,通过设置实验组和对照组检测miR-141,TM4SF1以及VEGF-A和E-cadherin的表达水平。3、裸鼠用于体内试验,制造动物肿瘤模型对肿瘤血管生成进行观察对比。【结果】1.对90例胰腺癌患者的正常及肿瘤组织标本进行q RT-PCR,western-blot和免疫组化以及GEO数据库分析,结果表明胰腺癌细胞中miR-141表达下降与TM4SF1表达的上升,两者的表达呈负相关。2.对比分析临床病人的基本资料,结果显示miR-141和TM4SF1两者的差异性表达都与胰腺癌患者临床病理特征有关,其中低生存率与miR-141表达缺失和TM4SF1表达上调有关。3.在体外血管形成实验中使用量化软件观察到加入SW1990-141Moe TM4SF1和Bx Pc-3-141I培养基质的HUVEC管形成的内皮细胞网络数量明显高于加入SW1990-141M和Bx Pc-3-141I-si TM4SF1的条件培养基下HUVEC管形成的内皮细胞网络数量。4.体内基质血管生成实验中检测基质凝胶溶解后模型裸鼠体内的血红蛋白浓度,SW1990-141M和Bx Pc-3-141I-si TM4SF1组的血红蛋白水平显著降低,来自SW1990-141M-oe TM4SF1和Bx Pc-3-141I的条件培养基培养的裸鼠体内血红蛋白浓度较高,意味着SW1990-141M-oe TM4SF1和Bx Pc-3-141I促进HUVEC管的形成,而来自SW1990-141M和Bx Pc-3-141I-si TM4SF1的条件培养基未能诱导HUVECs。5.在体外血管形成实验和体内裸鼠肺转移实验中发现miR-141抑制胰腺癌细胞EMT和血管生成,抑制裸鼠模型肺癌转移:抑制miR-141表达的胰腺癌肿瘤模型小鼠中肺转移结节数量明显高于对照组及过表达miR-141的小组。6.通过对胰腺癌细胞SW1990中特异性过表达miR-141并且在miR-141过表达的同时敲减TM4SF1,在Bx Pc-3细胞中敲减miR-141的同时过表达TM4SF1,发现miR-141表达缺失但是其诱导了TM4SF1的表达,使得VEGF-A表达增加、E-cadherin表达减少。7.对胰腺癌细胞SW1990和Bx Pc-3细胞使用AKT激活剂和抑制剂处理,发现miR-141直接作用于TM4SF1使其表达降低,并反过来诱导E-cadherin的表达,同时通过抑制AKT信号通路的激活来降低VEGF-A的表达。【结论】本研究证明了以下几点:1.在胰腺癌肿瘤细胞中,miR-141抑制TM4SF1的表达。2.胰腺癌患者的临床病理特征和低生存率与miR-141表达缺失和TM4SF1上调有关。3.miR-141通过靶向作用于TM4SF1,激活AKT信号通路,抑制胰腺癌细胞EMT以及血管生成,提示miR-141和TM4SF1可能是一种潜在的控制胰腺癌的治疗方式。