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喹乙醇（Olaquindox,OLA）属喹噁啉类药物，因其抗菌谱广、可提高蛋白同化作用，常被用于抗菌促生长剂。但喹乙醇有蓄积性残留现象，过量使用时有致畸和致突变的可能。欧盟、美国等已禁止其用于饲料添加剂，我国规定只能添加于低于35㎏体重的猪饲料。目前，该产品的残留检测主要依靠HPLC法，但不易普及。酶联免疫技术因其具有高通量、灵敏和特异等优点，所以被广泛用于药物残留检测中。但目前市场上国产的喹乙醇ELISA检测试剂盒对喹乙醇的结构类似物交叉性较高。为此，本研究运用活泼酯化法合成了喹乙醇全抗原，开展了单克隆抗体制备和评价研究，旨在为改善喹乙醇ELISA检测试剂盒的特异性提供科学依据。1.运用活泼酯化法合成喹乙醇免疫抗原OLA-NHS-BSA、检测抗原OLA-NHS-OVA，并利用BCA法和紫外分光光度法评估了免疫抗原和检测抗原的蛋白含量和偶联比，蛋白水平分别为4.69㎎/mL和8.85㎎/mL；两种抗原的偶联比分别为1:4.9和1:6.4。2.分别用50、100、200μg/只剂量免疫Balb/C小鼠，结果显示每隔2W免疫一次，共免4次后，100μg/只剂量组小鼠血清效价高于50μg/只和200μg/只剂量组，效价达1:16000。用PEG诱导细胞融合，筛选得到5B10和3B6两株可稳定传代的杂交瘤细胞株，同种型鉴定结果显示5B10株分泌IgM/κ型抗体、3B6株分泌IgG2a/κ型抗体。5B10克隆细胞株培养上清效价为1:1.28×102，制备的腹水效价为1:1.28×104；3B6细胞株培养上清的效价为1:5.12×104，制备的腹水效价为1:1.6×107。3B6细胞株制备的腹水亲和常数（Ka）为5.47×109L/mol，IC50为14.74ng/mL。交叉试验结果显示，3B6制备的腹水与卡巴氧和乙酰甲喹有交叉性，交叉率分别为3.62%和4.16%；与MQCA、QCA和其他类药物无交叉性。3.运用方阵滴定法确定了检测抗原的包被浓度和喹乙醇单抗的工作浓度，分别为0.188μg/mL、1:256000，山羊抗小鼠IgG-HRP的最佳稀释度为1:10000，喹乙醇和单抗的反应条件为37℃、0.5h；优化条件下间接竞争ELISA检测喹乙醇的标准曲线，回归方程为Y=-0.3699x+0.9322，相关系数R2=0.9885，在0.51～370.37ng/mL浓度范围内线性良好。4.以海藻糖作为生物保护剂，考察其对间接ELISA检测系统稳定性的影响，在封闭液中分别加入2.5%、5%、10%和20%的海藻糖，结果显示海藻糖对间接ELISA检测板上预包被抗原的活性有一定的保护效果，且以2.5%海藻糖加入时保护作用较佳。