研究背景喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）是最常见的喉癌病理类型,占据呼吸道肿瘤发病率第二位。值得注意的是,在中国喉鳞癌的发病率大约是美国的四倍,每年有超过15000人死于喉癌。对于晚期喉鳞癌患者,以顺铂为基础的化疗方案是标准的一线化疗方案,铂类药物通过杀死细胞或者通过阻断细胞分裂阻止癌细胞的生长。然而,基于铂类的联合化疗方案并没有提高晚期喉鳞癌患者的总生存率（OS）,没有使晚期喉鳞癌患者生存受益,其主要原因是化疗药物的毒性作用及部分喉癌患者对化疗药物耐受。可见,喉癌化疗耐药是喉癌临床治疗中亟待解决的问题。因此,探索喉鳞癌化疗耐药的潜在机制对于喉癌的临床治疗是迫切且有意义的。肿瘤靶向治疗是继肿瘤全身化疗后发展起来的对肿瘤细胞更具有靶向性的治疗方案。与化疗药物相比,靶向治疗药物对肿瘤细胞的针对性强,能够特异性识别肿瘤细胞的特定位点而对正常细胞损伤小,因此靶向治疗的毒副作用低于化疗药物。近年来随着肿瘤靶向治疗的发展,靶向药物也逐渐用于喉癌的治疗,成为一项重要的喉癌治疗手段。因此,不断探索新的喉癌治疗靶点,有望提高喉鳞癌患者的生存获益,对于喉癌临床治疗具有重要意义。LncRNA（Long noncoding RNA）是一类无或弱蛋白编码潜力的RNA,又称长链非编码RNA,可作为mi RNA的宿主基因,或作为分子支架引导蛋白质与靶基因结合,或通过保护目标蛋白不被降解进而稳定蛋白结构来发挥功能。有证据表明lncRNA参与肿瘤进展和药物抵抗。不同的lncRNA通过改变多种药物抵抗（MDR）转运体,调节细胞抗凋亡能力、影响上皮间充质转化（EMT）、调控肿瘤干性等方式参与肿瘤化疗耐药。然而,目前对于lncRNA调控喉癌化疗耐药的分子机制研究十分有限。本研究探讨了lncRNA FOXD2-AS1与喉鳞癌化疗耐药之间的关系,阐述了FOXD2-AS1通过调控喉鳞癌干性促进喉癌化疗耐药的分子机制。研究目的1.检测FOXD2-AS1在喉癌细胞及组织中的表达水平及与喉癌化疗耐药的关系。2.探讨FOXD2-AS1调控喉癌化疗耐药分子机制,从而为喉癌治疗提供潜在治疗靶点。研究方法1.收集24对喉鳞癌组织及癌旁正常组织标本,利用实时荧光定量PCR检测这24对临床样品组织中FOXD2-AS1的mRNA表达水平。并用Graphad Prism8软件统计分析FOXD2-AS1表达与喉癌患者对化疗敏感性的关系。2.构建FOXD2-AS1过表达及FOXD2-AS1低表达喉癌稳定转染细胞株,并通过MTT实验、TUNEL实验、克隆形成实验检测顺铂化疗条件下FOXD2-AS1沉默/过表达对喉癌细胞增殖及凋亡水平的影响,从而反映FOXD2-AS1表达失调对喉癌顺铂化疗效果的影响。3.利用裸鼠皮下成瘤模型进行体内实验,即裸鼠皮下接种干扰FOXD2-AS1表达的喉癌细胞株并予以顺铂化疗后,每周检测裸鼠皮下瘤的体积及质量,并对皮下瘤进行组织切片和免疫组化染色,进而反映FOXD2-AS1对裸鼠皮下瘤化疗敏感性的影响。4.通过细胞成球实验、侧群细胞及CD133+细胞比例实验检测FOXD2-AS1对喉癌干性特征的影响。5.利用免疫共沉淀实验、Western blotting实验、免疫荧光实验、荧光素酶报告基因检测FOXD2-AS1诱导喉癌化疗敏感性的关键分子及信号通路。研究结果1.FOXD2-AS1在喉鳞癌组织中表达明显升高,肿瘤分期越高,FOXD2-AS1升高水平越明显。且在肿瘤化疗后复发患者喉鳞癌组织中FOXD2-AS1表达水平高于无复发患者。MTT实验、TUNEL实验、克隆形成实验证实FOXD2-AS1过表达促进顺铂化疗过程中喉鳞癌细胞的增殖。2.细胞成球实验、免疫共沉淀实验、侧群细胞及CD133+细胞比例实验证实FOXD2-AS1通过调控STAT3活性维持喉鳞癌细胞干性进而促进喉鳞癌化疗耐药。体内实验也证实FOXD2-AS1过表达促进喉鳞癌化疗耐药,而STAT3选择性抑制剂Stattic可逆转FOXD2-AS1过表达诱导的喉鳞癌化疗耐药。研究结论1.FOXD2-AS1在喉癌中高表达并能促进喉鳞癌化疗耐药。2.FOXD2-AS1作为STAT3和其转录辅助因子PRMT5的结合的分子支架,通过招募PRMT5,促进PRMT5与STAT3结合,增强STAT3活性,维持喉鳞癌细胞干性,诱导喉癌化疗耐药。3.STAT3选择性抑制剂Stattic能够恢复FOXD2-AS1高表达的喉鳞癌细胞对顺铂化疗的敏感性。