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目的：肿瘤是威胁人类健康的重大疾病之一。香菇(Lentinus edodes (Berk) Sing)属真菌门,担子菌亚门,层菌纲,伞菌目,侧耳科,香菇属,又名香蕈或香椹,是名贵的食药用菌之一,含有多种有效药用成分。研究发现,香菇能提高机体的免疫力,能阻止癌细胞发生,对已诱发的癌细胞亦有抑制作用。目前香菇多糖作为一种重要的生物反应调节剂,已广泛应用于肿瘤的辅助治疗中。除多糖外,香菇中还含有大量蛋白质、氨基酸和多种微量元素,但国内外对香菇发酵液及其蛋白质的抗肿瘤机制却鲜有报道。香菇C91-3是我课题组经多年研究筛选的一株其发酵液具有抗肿瘤、抗细菌作用的真菌,其发酵液中除含有与子实体提取物相似的大量多糖和氨基酸成分外,还含有多种蛋白成分。发酵液具有良好的抗肿瘤、抗细菌的作用。前期研究证实,香菇C91-3菌丝发酵液蛋白LFP91-3具有体内抑制肿瘤生长,体外直接杀伤肿瘤作用。本试验主要在前人的基础上,以实验小鼠为给药对象,对香菇C91-3菌丝发酵液蛋白LFP91-3口服后的抑瘤作用及相关机制进行初步探讨。方法：发酵液经离心、过滤、盐析、透析、提取蛋白后,以真空干燥机浓缩20倍后进行下一步实验。(一)LFP91-3口服液对荷瘤小鼠生存期的影响取60只昆明小鼠,全部予S180细胞(小鼠腹水型肉瘤细胞株)腹腔荷瘤。荷瘤后随机分为6组：蒸馏水组、环磷酰胺(CTX)组、香菇多糖(LNT)组、香菇C91-3菌丝发酵液蛋白(LFP91-3)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。每组10只,荷瘤24小时后分别予蒸馏水、CTX3mg、LNT0.5mg、LFP91.3 250ug、500ug、1000ug,每次0.5ml/只,在第1、3、5、7、9、11、13、15天灌胃给药,共计8次,分别观察六组荷瘤小鼠的生存期,研究香菇C91-3菌丝发酵液蛋白(LFP91-3)的最适剂量。(二)LFP91-3口服液对荷瘤小鼠免疫细胞和免疫因子的影响另取20只昆明小鼠,建模方法同上,荷瘤后随机分为2组：蒸馏水组、香菇C91-3菌丝发酵液蛋白(LFP91-3)最适剂量组。每组10只,荷瘤24小时后分别予蒸馏水、LFP91-3 500ug,每次0.5ml/只,给药时间同上。于接种肿瘤细胞后第16日处死小鼠,各组小鼠分别摘除眼球取血,之后脱颈处死取脾。(1)淋巴细胞增殖反应实验：将脾细胞放入Hanks液中剪成糊状,200目不锈钢细胞网过滤分成单个脾细胞,用Hanks液洗涤,调整浓度5×106/ml。加入96孔板,每孔200μl,每个实验孔再加ConA(50μg/ml)20μl,对照孔RPMI-1640培养液20μl,各设3个复孔,于37℃,5%CO2温箱中培养68小时,离心1000 r/min 10min,吸弃上清100μl,加MTT液10μl,培养4小时,加DMSO液100μl,充分吹打使紫色结晶完全溶解后使用酶标仪测吸光OD值。(2)荷瘤小鼠血清IL-2含量的测定：如上所述分别摘除小鼠眼球取血,制备血清,用小鼠IL-2 ELISA检验试剂盒,采用双抗体夹心酶联免疫检测法,根据标准品OD值绘制曲线,从标准曲线上查出待检标本中IL-2的含量。(3)荷瘤小鼠血清TNF-α含量测定：方法同(2)。研究LFP91-3口服液对荷瘤小鼠的抑瘤作用及机制。结果：香菇C91-3菌丝发酵液蛋白(LFP91-3)口服液对荷瘤小鼠的影响：1.能延长荷瘤小鼠的生存期,抑制肿瘤生长。LFP91-3口服后能显著延长荷瘤小鼠生存时间,对由S180肿瘤细胞所致的腹水型荷瘤小鼠,LFP91-3Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的存活期的平均值分别为：24.80d、25.10d、25.60d,较蒸馏水组(17.80d)有显著延长(P<0.05)。LFP91-3组在各浓度下,与LNT组(24.30d)和CTX组(24.70d)无明显差异(P>0.05),且荷瘤小鼠的存活时间在适宜范围内随LFP91-3浓度的增大而延长,存在一定的剂量依赖关系。2.能显著提高荷瘤小鼠的细胞免疫和体液免疫。(1)淋巴细胞增殖率：LFP91-3最适剂量组的淋巴细胞增殖率0.44±0.14,显著高于蒸馏水组淋巴细胞增殖率0.18±0.09(P<0.01)。(2)血清IL-2和TNF-α的含量：LFP91-3最适剂量组的血清IL-2和TNF-α分别为35.05±17.29 pg/ml,84.27±16.88 pg/ml,与蒸馏水组血清IL-2和TNF-α分别30.5±3.58 pg/ml,48.33±16.70 pg/ml,有明显增加(P<0.01)。结论：香菇C91-3菌丝发酵液蛋白(LFP91-3)口服液具有较好的体内抑瘤作用,口服后能明显延长荷瘤小鼠的生存期,抗肿瘤效果与临床免疫调节药香菇多糖和临床抗肿瘤药物环磷酰胺无明显差异,且荷瘤小鼠的存活时间在适宜范围内随LFP91-3浓度的增大而延长,存在一定的剂量依赖关系。其作用可能是通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡及增强机体免疫功能来完成。香菇发酵液蛋白与临床抗肿瘤药物相比,具有疗效高、毒副作用小等优点。因此,作为香菇中另一种重要的抗肿瘤活性物质,香菇发酵液蛋白的抗肿瘤活性和机制研究还有更大的开发空间和挖掘潜力。