目的本研究对5种新型冠状病毒RT-PCR核酸试剂盒进行一致性及检出能力的评价;对一种国产新型冠状病毒核酸试剂盒进行性能验证和临床评价,以期评估试剂盒检测能力是否符合厂商声明及满足临床检测需求。方法依据CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》等文件,结合核酸参考品、标准品及临床样本,对5种RT-PCR试剂盒进行一致性及检出能力的评价;对一种国产试剂盒包括阴阳性符合率、检出限、精密度、交叉反应进行性能验证和临床评价。采用5种新型冠状病毒核酸检测试剂盒对20例COVID-19确诊患者和20例阴性鼻咽拭子样本进行一致性分析。选取一份阳性临床标本（Ct:ORF1ab 26.49,N:27.69）用无RNA酶水稀释5倍,定义为浓度1。使用无RNA酶水将浓度1稀释3、9、27和81倍,最终得到浓度1、浓度2（1/3浓度1）、浓度3（1/9浓度1）、浓度4（1/27浓度1）和浓度5（1/81浓度1）,一共5个浓度梯度。使用5种试剂盒对浓度1～5浓度梯度重复检测5次,用于评估5种新型冠状病毒核酸检测试剂盒的检测能力。采用不同浓度RNA参考品及24例临床样本评价一种国产试剂盒的阴阳符合率。采用不同浓度参考品及N基因片段标准品评价检出限。使用两个新冠核酸阳性临床标本评估试剂盒的精密度。使用4个人类冠状病毒质粒和11个呼吸道病原体质粒来评估试剂盒的交叉反应性。结果梓健、达安、伯杰试剂盒的阳性符合率为100%,之江、亚能试剂盒的阳性符合率为90%;5种试剂盒的阴性符合率均为100%。5种试剂盒在浓度1～浓度3梯度区间的检出率均为100%。在浓度4～浓度5梯度区间,达安的总检出率最高,其次为亚能和伯杰。一款国产新冠核酸试剂盒对不同浓度RNA参考品及24例临床样本的阴性和阳性符合率均为100%。5拷贝/μL参考品检出率为95%,同时5拷贝/μL标准品的检出率为100%,厂商声明的检出限验证通过。试剂盒对ORF1ab基因、N基因、S基因的精密度CV均小于5%。该试剂盒与人冠状病毒（229E、OC43、NL63、HKU1）、甲型流感病毒（H1N1、H3N2、H5N1）、乙型流感病毒Victoria、人类副流感病毒Ι型、鼻病毒、呼吸道合胞病毒A型、肺炎支原体、肺炎衣原体、肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌不存在交叉反应。结论5种新型冠状病毒RT-PCR核酸试剂盒有良好的一致性和检出能力。一款国产新型冠状病毒核酸检测试剂盒具有可接受的分析性能特征,符合厂商声明,可以应用于SARS-CoV-2的常规检测。