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目的:子宫内膜异位症(Endometriosis, EM)是育龄期妇女的常见病和多发病,近年来发病率有上升趋势,严重影响患者的身心健康。其发病机制目前还不明确,新血管生成成为一种新的病因学说,抗血管生成治疗成为目前EM治疗研究的热点。去甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiaretic acid, NDGA)是从长青灌木中提取的一种天然药物成分,也可以人工合成,具有脂氧合酶(Lipoxygenase, LOX)抑制作用。NDGA已被证实具有多种生物学作用,如抗炎、抗氧化、降血糖、抗肿瘤、抗过敏等。本实验所使用的NDGA是从Larrea tridentata长青灌木中提取的天然药物成分,旨在通过建立大鼠子宫内膜异位症模型,研究NDGA对子宫内膜异位症在位内膜和异位内膜的血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor,VEGF)、胎肝激酶-1/含激酶插入功能区受体(fetal liver kinase 1/kinaseinsert domain-containing receptor, Flk-1/KDR)、5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)表达的影响,探讨NDGA对EM治疗作用的可行性,为EM的治疗开辟新的途径。方法:1大鼠子宫内膜异位症模型的建立健康性成熟雌性未交配SD大鼠50只,体重200±20g。术前给予0.02 mg/kg己烯雌酚灌胃5天,使手术时大鼠统一处于动情期。以浓度为43g/L的水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉,腹中线耻骨上1cm处切开约2cm长切口,分离出大鼠的右侧子宫,近输卵管端切下一段长约1cm的子宫段,切割成5mm×5mm大小的子宫片,将切好的子宫片内膜面紧贴左侧腹壁,丝线固定,向腹腔滴入0.2ml庆大霉素注射液,逐层关腹。术后肌肉注射庆大霉素0.1ml/只×5d。术后第10天起给予己烯雌酚灌胃×5d。术后4周开腹,观察移植物生长情况,测量异位病灶的体积。2大鼠子宫内膜异位症模型的药物治疗将造模成功的39只大鼠随机分成5组,空白对照组,NDGA低、中、高剂量组及米非司酮组。低、中、高剂量组分别按30 mg/kg,60 mg/kg,90 mg/kg剂量皮下注射3%NDGA,隔日1次,共计20d。空白对照组注射按60 mg/kg隔日皮下注射PBS液,共20d。米非司酮组按2mg/kg灌胃×28d。治疗结束后分别取大鼠腹腔冲洗液和3ml腹主动脉血,离心,取上清-70℃保存,用双抗体夹心ABC-ELISA法测5-LOX值。取在位和异位子宫内膜,10%福尔马林固定,采用免疫组化PV两步法检测VEGF、KDR、5-LOX的表达。所有数据采用SPSS13.0统计软件进行分析,P<0.05认为具有统计学意义。以方差分析和非参数检验法进行分析。结果:1异位病灶生长情况术后四周移植内膜成活率为78%(39/50),异位灶平均体积为129.639±17.627mm~3。治疗后空白对照组NDGA低、中、高剂量组及米非司酮组异位内膜抑制率分别为-17.90±2.45%、14.49±1.04%、40.26±2.73%、59.05±1.82%、57.16±2.57%。空白对照组治疗后体积较治疗前显著增大,与其他个治疗组比较具有统计学意义,P<0.05。NDGA低剂量组异位病灶体积未见明显缩小,NDGA三个剂量组随着剂量的增加抑制率上升,三组间比较均具有统计学意义,P<0.05。米非司酮组抑制率显著高于NDGA低剂量组和中剂量组,具有统计学意义,P<0.05;与高剂量组比较,无显著性差异,P>0.05。NDGA中剂量组、高剂量组和米非司酮组异位病灶体积缩小,异位内膜腺体数目较空白对照组和低剂量组数目减少、腺腔缩小,间质纤维化。2血清及腹腔液5-LOX水平空白对照组血清和腹腔液5-LOX水平均显著高于NDGA三个治疗组,具有统计学意义,P<0.05;随着NDGA剂量的增加血清和腹腔液5-LOX水平下降越明显,三个剂量组间相比较均具有统计学意义。米非司酮组血清和腹腔液5-LOX水平均远远高于其他各治疗组,有统计学意义,P<0.05。空白对照组和NDGA低剂量组的腹腔液5-LOX水平均显著高于其血清5-LOX水平,差异有统计学意义,P<0.05。NDGA中、高剂量组和米非司酮组的血清5-LOX水平与其腹腔液5-LOX水平比较无显著性差异,P>0.05。3免疫组化结果3.1 VEGF主要在在位内膜及异位内膜的腺上皮细胞胞浆中表达。NDGA低剂量组、中剂量组、米非司酮组、高剂量组在位内膜及异位内膜VEGF的表达强度依次下降,均显著低于空白对照组,P<0.05。NDGA高、中、低三个剂量组间VEGF表达强度的差异具有统计学意义,并随剂量的增加表达强度下降越明显。米非司酮组在位及异位内膜的VEGF表达强度低于NDGA中剂量,高于NDGA高剂量组,但与两组相比,差异均无统计学意义,P>0.05。3.2 KDR主要在在位内膜及异位内膜腺上皮细胞胞浆、间质和部分血管内皮细胞的胞浆中表达。NDGA低剂量组、中剂量组、米非司酮组和高剂量组在位内膜及异位内膜KDR的表达强度依次下降,均低于空白对照组,P<0.05。NDGA三个剂量组之间比较具有统计学意义,并随剂量的增加KDR表达强度下降越明显。米非司酮组在位及异位内膜的KDR表达强度低于在NDGA中剂量组的表达,差异具有统计学意义;高于在NDGA高剂量组的表达,但差异无统计学意义。3.3 5-LOX主要在在位内膜及异位内膜腺上皮细胞的胞浆和胞核中表达。空白对照组、NDGA低剂量组、中剂量组和高剂量组在位内膜及异位内膜的5-LOX表达强度依次下降,各组间比较均具有统计学意义,P<0.05,并随NDGA剂量的增加5-LOX表达强度下降越明显。米非司酮组在位内膜及异位内膜5-LOX表达强度均显著高于其他各实验组,具有统计学意义,P<0.05。结论:1自体子宫移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型具有可行性。2 NDGA中剂量(60 mg/kg)和高剂量(90 mg/kg)对大鼠子宫内膜异位症具有着抑制作用,可以显著抑制在位内膜及异位内膜5-LOX、VEGF、KDR的表达,并能显著降低血清及腹腔液5-LOX浓度,对子宫内膜异位症有治疗作用。NDGA 30mg/kg对大鼠子宫内膜异位症无明显抑制作用。NDGA 90 mg/kg组为最佳治疗效果组。3 NDGA对大鼠子宫内膜异位症的治疗作用呈剂量依赖性。NDGA可能是主要通过抑制在位及异位子宫内膜5-LOX的表达及激活来下调VEGF及其受体KDR的表达,来发挥抗血管生成的作用。4米非司酮可能是通过降低大鼠COX-2和P450arom的表达而使5-LOX代偿性升高。