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背景与目的子宫内膜癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一,近年来发病率呈逐年上升趋势,缺乏孕激素对抗的高雌激素长期刺激可引起子宫内膜的异常增生并向恶性转化,增加子宫内膜癌的发病风险,但具体机制尚不完全明了。目前,雌激素通过经典的核基因转录效应对子宫内膜细胞增殖的调控作用已得到广泛认同,但是近年来发现,雌激素还可通过非基因转录效应迅速激活子宫内膜癌细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)信号传导通路等。MAPK/ERK信号传导通路的异常活化与许多恶性肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肝癌、胰腺癌、结肠癌等的发生发展关系密切。课题组前期体外实验结果表明：阻断MAPK/ERK信号传导通路可阻滞子宫内膜癌细胞进入细胞周期,抑制癌细胞增殖,促进其凋亡,这为子宫内膜癌的治疗提供了新靶点和新思路。PD98059是MAPK/ERK信号传导通路的特异性抑制剂,可通过抑制ERK的活化阻断MAPK/ERK信号传导通路对癌细胞生长的刺激作用。本研究主要通过体内实验来观察阻断MAPK/ERK信号传导通路对雌激素受体(ER)表达水平不同的Ishikawa、HEC-1A子宫内膜癌细胞系的体内抗增殖效果,进一步探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路对子宫内膜癌的治疗价值,为子宫内膜癌的有效治疗提供新思路。材料与方法1材料子宫内膜癌细胞系Ishikawa及HEC-1A均由北京大学人民医院妇产科重点实验室的魏丽惠教授惠赠。BALB/c雌性裸鼠购买自北京维通利华实验动物有限责任公司,4-6周龄,体重均处于15-20g之间,购回后饲养于河南省实验动物中心(SPF级)。2方法体外培养人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞,将对数生长期的两种细胞分别接种于12只裸鼠背部皮下,建立子宫内膜癌细胞裸鼠移植瘤模型。将两种细胞系成瘤阳性裸鼠分别随机分为2组：对照组和实验组,每组6只,分别给予生理盐水和PD98059(50mg/kg)腹腔注射,每周2次,共3周,观察各组裸鼠移植瘤生长状况,建立移植瘤生长曲线,计算抑瘤率。给药3周后处死裸鼠,取肿瘤组织切片进行HE染色,原位末端标记法(TUNEL)检测移植瘤组织细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测各组织中ERK1/2的活化情况。3统计学分析采用SPSS17.0统计软件进行正态分布、方差齐性检验,t检验,a=0.05作为检验水准。结果1.实验组移植瘤生长速度明显低于对照组,给药3周后,Ishikawa细胞移植瘤实验组平均体积[(1782.83±122.93)mm3]明显小于对照组平均体积[(3110.60±244.81)mm3],差异有统计学意义(t=-4.847,P<0.01),HEC-1A细胞实验组移植瘤平均体积为(1573.21±108.05)mm3,对照组裸鼠移植瘤的平均体积为(2664.73±114.55),实验组移植瘤体积明显小于对照组,差异有统计学意义(t=-6.932,P<0.001)。PD98059对两者的抑瘤率分别为34.82%、40.96%。2.HE染色见移植瘤组织中细胞学形态和人子宫内膜腺癌组织细胞病理学形态基本相符合,病理学证实为人子宫内膜腺癌细胞裸鼠移植瘤模型；与对照组相比,实验中组肿瘤细胞核浆比例相对较小,部分细胞出现核固缩现象,可见较多凋亡、坏死细胞；肿瘤组织内可见部分片状坏死及炎性细胞浸润,有明显的纤维化形成。3.原位末端标记(TUNEL)检测结果示：Ishikawa细胞移植瘤实验组中组织细胞凋亡率为(18.57±2.69)%,对照组细胞凋亡率为(3.33±±1.18)%,实验组凋亡率明显大于对照组,差异有统计学意义(t=-12.705,P<0.05)。HEC-1A细胞移植瘤实验组中细胞凋亡率为(21.33±±3.07)%,对照组细胞凋亡率为(4.23±0.63)%,实验组凋亡率也明显高于对照组,差异具有统计学意义(t=-13.374,P<0.05)。4. Western blot检测结果显示,两种细胞系实验组移植瘤组织中的P-ERK表达均显著低于对照组。结论1.PD98059能有效阻断MAPK/ERK1/2信号传导通路,抑制子宫内膜癌细胞裸鼠移植瘤的生长,提示细胞内信号传导通路可作为治疗子宫内膜癌的新靶点,通路抑制剂PD98059有望成为治疗子宫内膜癌的一种新的靶向药物；2.PD98059对ER阳性表达的Ishikawa细胞系及ER阴性的或低表达的HEC-1A细胞系都有明显的抑制作用,为ER阴性子宫内膜癌的治疗提供新的有效的方法和依据。