色谱方法在纯化蛋白中的应用研究

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本课题主要内容是建立新的价廉高效的纯化抗人EGFR单克隆抗体的色谱方法以及建立从鸡蛋清中大规模纯化溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的色谱方法。使用Protein A亲和色谱、离子交换色谱(IEC)、疏水相互作用色谱(HIC)方法从小鼠腹水中纯化抗人EGFR单克隆抗体,并使用BCA、ELISA、SDS-PAGE等方法检测产品的蛋白浓度、活性、纯度。使用离子交换色谱方法从鸡蛋清中纯化溶菌酶,卵转铁蛋白和卵白蛋白,并使用BCA、SDS-PAGE等方法检测产品的浓度和纯度。实验结果:通过Protein A亲和色谱一步纯化得到了高纯度的抗人EGFR单克隆抗体。由BCA蛋白检测测定得到样品腹水中的抗体浓度是3.990 mg/mL。通过阴离子交换色谱与疏水相互作用色谱两步纯化得到高纯度抗人EGFR单克隆抗体,由BCA蛋白检测测定得到样品腹水中的抗体浓度是2.340 mg/mL。通过阳离子交换色谱方法,9 L的蛋清溶液(含鸡蛋清3 L)中纯化得到7.486 g溶菌酶。通过阴离子交换色谱两步纯化,200 mL的蛋清溶液(含鸡蛋清66.7 mL)中纯化得到209.385 mg卵转铁蛋白。通过阳离子交换色谱与阴离子交换色谱两步纯化,3 mL的蛋清溶液(含鸡蛋清1 mL)中纯化得到卵白蛋白5.283 mg。
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