苏淮猪抑制素α亚基基因多态性分析和仔猪卵巢发育研究

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抑制素α亚基与βA亚基异构化形成抑制素A,而α亚基与βB亚基形成抑制素B,且抑制素α亚基上存在糖基化位点,因此抑制素α亚基是形成抑制素的关键因子。抑制素A是TGFβ家族成员之一,在调控卵巢发育及激素分泌中具有重要的作用。在哺乳动物外周血中INHA除了与激活素(activin)及卵泡抑素(FSH-suppressingprotein,FSP)共同调控FSH的形成和分泌,还可以通过旁分泌模式和自分泌模式调节卵巢颗粒细胞和膜细胞的生长、增殖、分化,进而影响卵泡的发育。并且INHA也参与卵巢黄体细胞形成及凋亡过程。INHA基因及其免疫制剂在哺乳动物分子育种繁殖,特别是反刍动物育种繁殖中发挥者重要的作用。INHA也在多囊卵巢综合症、卵巢早衰、卵巢癌的发生中起着重要作用,许多卵巢疾病都是与INHA表达紊乱相关。随着现代文明发展,环境污染越来越严重,仔猪在生长过程中,极易受到外部环境的干扰,特别是环境内分泌干扰物(EEDs)不仅能引起人的性早熟,也能导致猪的生殖器官过早发育。本研究旨在分析苏淮猪抑制素α亚基基因多态性和研究仔猪卵巢过早发育对其功能的影响。根据GeneBank上已经登录的猪(Susscrofa)的基因序列设计引物,利用生物信息学软件分析该序列。分析抑制素α亚基基因在苏淮猪中的的多态性,对抑制素α亚基基因存在的多态位点与苏淮猪产仔数进行关联分析。对60日龄育屠宰的肥仔猪卵巢卵巢切片,利用HE染色和免疫组织化学进行分析。主要研究结果如下:1.抑制素α亚基基因5’UTR区生物信息学分析苏淮猪抑制素α亚基基因5’UTR区序列全长为67bp,通过同源比对发现猪抑制素α亚基基因5’UTR序列与人、山羊、猪同源性较高。使用在线软件Methprimer(http://www.urogene.org)对猪抑制素α亚基基因5’UTR区序列进行预测发现,在抑制素α亚基基因5’UTR序列没有CpG岛。使用在线软件genomatic(www.genomatic.de.com)对猪抑制素α亚基基因5’UTR区序列进行转录因子预测分析,结果表明抑制素α亚基基因5’UTR区存在多个转录因子,如PLAG1、PRDM5、EKLF、TBX21、CAX6 等。2.苏淮猪抑制素α亚基基因多态性与产仔数的关系分析苏淮猪抑制素α亚基基因的单核苷酸多态性(SNP),测序结果发现在5,UTR区存在1个多态位点(-42G>A),在CDS区存在4个多态位点(分别为3241C>T、3249A>G、3285G>A和3294G>A),这四个位点均能引起氨基酸改变,但不影响抑制素α亚基的三级结构。在-42G>A位点,G为优势等位基因(频率为0.553)。关联分析发现GG基因型的苏淮猪产仔数显著高于AA型。通过5’UTR区上的转录因子预测发现,-42G>A位点能够改变结合的转录因子,进而影响抑制素α亚基的转录。而在CDS区存在4个多态位点上的基因型与苏淮猪产仔数差异不显著。3.仔猪卵粟过早发育的组织学及其PCNA和Caspase3表达特性在60日龄仔猪中,随机选取8头屠宰取卵巢和子宫,根据屠宰结果分成卵巢发育正常组和卵巢过早发育组。进行组织学观察和免疫组织化学分析。结果表明,60日龄卵巢发育正常组与卵巢过早发育组卵巢、子宫重差异极显著(P<0.01),卵巢过早发育组卵巢已经出现大量有腔卵泡,通过HE染色显微镜观察,60日龄卵巢发育正常组以原始卵泡、次级卵泡为主兼少量初级卵泡。60日龄卵巢过早发育组卵巢出现多个三级卵泡,这些三级卵泡发育正常。PCNA、Caspase-3主要在颗粒细胞中表达,在卵巢卵巢过早发育组和卵巢发育正常组中,PCNA、Caspase-3在原始卵泡、次级卵泡、初级卵泡颗粒细胞中表达没有差异。在卵巢过早发育组卵巢三级卵泡中,PCNA在颗粒细胞中强表达,而Capase-3弱表达,有腔卵泡中的颗粒细胞具有正常增值功能,说明这些三级卵泡能够继续发育乃至排卵,卵巢过早发育组能够形成发情周期。原始卵泡库中的原始卵泡数量是固定的,从原始卵泡到形成三级卵泡过程中会发生大量卵泡闭锁。卵巢过早发育组与卵巢发育正常组相比,消耗大量原始卵泡,易出现卵巢和子宫发育不良。我们结果提示:卵巢过早发育会耗及卵巢卵母细胞库,对母猪后期利用年限产生不利影响。
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