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目的：慢性粒细胞白血病（Chronic Myelogenous Leukemia，CML）是一种起源于造血干细胞的恶性血液系统疾病，目前常用的CML治疗方法包括放射性治疗、化学药物治疗、异基因造血干细胞移植和BCR/ABL酪氨酸激酶抑制剂治疗。虽然可用于CML治疗方法较多，但上述各种方法都有其一定的局限性。本研究结合嵌合T细胞受体(chimeric T cell receptors，chTCR)和慢性粒细胞白血病免疫学研究成果，以人化单克隆抗体单链可变区片段、人CD8分子铰链区、人CD28分子跨膜及胞内结构域和人CD3ζ链胞内信号转导域为基础，构建可表达人化嵌合TCR（humanized chrimeric T cell receptors，hchTCR）的逆转录病毒，并以其修饰健康供者T淋巴细胞，验证修饰T淋巴细胞对CML白血病细胞的体外杀伤效应，为将该方法应用于CML的过继性免疫治疗奠定理论基础。方法：以临床CML患者来源的白血病细胞为抗原免疫BALB/c小鼠，杂交瘤技术制备分泌CML白血病细胞特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株；应用生物信息学技术分析单克隆抗体编码序列，确定抗体重链及轻链可变区片段中的互补决定簇，通过与基因库中的已知人源抗体序列进行比对，获得与所制备抗体具有较高同源性的人源抗体序列，以鼠源抗体的CDR取代人源抗体中的CDR，构建人化scFv；将人化scFv、人CD8分子铰链区、人CD28分子跨膜及胞内结构域和人CD3ζ链胞内信号转导域的编码序列依次连接，构建可表达hchTCR的逆转录病毒；用所构建的逆转录病毒转染健康供者来源的T淋巴细胞，检测修饰T淋巴细胞的蛋白表达，及其在CML白血病细胞刺激下的细胞毒性作用、细胞增殖能力和细胞因子分泌功能。结果：成功构建稳定分泌CML白血病细胞特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株CMA1,抗体效价在1:1500以上。对CMA1细胞中抗体重链及轻链可变区的编码序列进行生物信息学分析，得到了鼠源抗体的CDR编码序列及与鼠源抗体可变区具有高度同源性的人源抗体编码序列。以序列分析结果为基础，用逆转录病毒空载质粒pBABEpuro成功构建了hchCMLTCR的逆转录病毒载体pBCT；同时成功构建了只含有人CD8分子铰链区、人CD28分子跨膜及胞内结构域和人CD3ζ链胞内信号转导域的质粒pB8283。通过将逆转录病毒载体转入PHA细胞中，构建了逆转录病毒pBABEpuro-hchCMLTCR和pBABEpuro-8283包装细胞株PHA-hchCMLTCR和PHA-8283。上述两种逆转录病毒转染健康供者外周血T淋巴细胞，通过体外试验证实经hchTCR修饰的T淋巴细胞具有CML白血病细胞特异性的细胞杀伤效应、细胞因子分泌效应和增殖效应。结论：通过体外试验，证实经人化嵌合TCR修饰的健康供者外周血T淋巴细胞具有CML白血病细胞特异性生物学活性，为进一步将该方法用于CML患者的过继性细胞免疫治疗奠定了基础。