目的:柯萨奇病毒B组3型（coxsackievirus B3,CVB3）是引起青少年急慢性病毒性心肌炎的主要病原体,严重危害人类健康,目前尚无有效的治疗方法。研究表明,宿主免疫应答造成的间接损伤是疾病进展的主要原因,故深入分析CVB3感染与宿主之间的相互作用,可为治疗病毒性心肌炎提供新的思路。近年来研究发现,宿主细胞的长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lnc RNA）可作为病毒与宿主作用的新的调控因子,在病毒复制和致病过程中发挥重要作用。因此,本研究利用基因芯片对CVB3感染的He La细胞差异表达的lnc RNAs进行筛选,找到了一条高表达的非编码RNA Lnc-ALPK2,通过生物信息学分析预测其靶基因为NEDD4L（neural precursor cell expressed developmentally down-regulated 4like,NEDD4L）,已有研究显示NEDD4L可参与I型干扰素产生途径,增强宿主抗病毒免疫反应。因此,本研究初步探讨Lnc-ALPK2-NEDD4L-IFN轴对CVB3复制的影响,为进一步认识病毒-宿主之间的相互关系,揭示病毒致病机制,筛选新的治疗靶基因,开发新的治疗病毒性心肌炎策略提供参考依据。方法:1.利用基因芯片对CVB3感染Hela细胞的lnc RNAs和m RNAs表达谱进行分析,筛选出具有差异表达的lnc RNAs和m RNAs,并通过q RT-PCR检测随机选取的5条lnc RNAs以验证芯片结果,进而找到一条高表达的非编码RNA Lnc-ALPK2,并在不同细胞系中验证其表达。2.用不同MOI（0、0.06、0.6、6、60）的CVB3感染Hela细胞,通过q RT-PCR检测Lnc-ALPK2的表达,以明确不同滴度CVB3感染后Lnc-ALPK2的表达;在CVB3感染后不同时间点（0、4、8、24、48h）收集细胞,通过q RT-PCR检测Lnc-ALPK2的表达,以明确不同感染时间Lnc-ALPK2的表达,进而选取合适病毒感染滴度和感染时间。3.合成Lnc-ALPK2的小干扰RNAs并构建其过表达质粒pc DNA3.1（+）-Lnc-ALPK2,转染Hela细胞后感染CVB3,24h后收取细胞,提取总RNA和总蛋白,通过q RT-PCR和Western blot检测CVB3 RNA和蛋白的表达;通过TCID50法检测细胞上清中CVB3病毒滴度,以明确lnc-ALPK2对CVB3复制的影响。4.利用Cis靶基因预测、NCBI、UCSC和Coding Potential Caculator等生物信息学数据库共同预测Lnc-ALPK2的靶基因,根据预测结果提示NEDD4L可能为Lnc-ALPK2的下游靶基因。5.在Hela细胞中分别转染质粒pc DNA3.1（+）-Lnc-ALPK2及Lnc-ALPK2的小干扰RNA,24h后分别收取细胞,提取总RNA和总蛋白,通过q RT-PCR和Western blot检测NEDD4L核酸和蛋白的表达及下游IFN-α、IFN-β的相对表达量。结果:1.qRT-PCR验证随机选取的Lnc-RNAs其表达水平与芯片结果一致,其中Lnc-ALPK2在CVB3感染不同细胞系中差异表达最明显。2.Lnc-ALPK2以MOI=0.6的CVB3感染Hela细胞后24h表达上调最明显（P<0.05）。3.在敲低Lnc-ALPK2的细胞中感染CVB3,病毒VP1和3D RNA表达量、VP1蛋白表达量以及细胞上清中CVB3病毒滴度明显低于对照组（P<0.05）;在过表达Lnc-ALPK2的Hela细胞中感染CVB3,病毒VP1和3D RNA表达量、VP1蛋白表达量以及细胞上清中CVB3病毒滴度显著高于对照组（p<0.05）。4.Cis靶基因预测、NCBI、UCSC和Coding Potential Caculator等生物信息学数据库预测结果Lnc-ALPK2为一条反义链lnc RNA,其对应的正义链基因为NEDD4L,Lnc-ALPK2和NEDD4L基因均位于18号染色体且部分基因互补,提示其与NEDD4L RNA结合的可能性。5.过表达Lnc-ALPK2,细胞中NEDD4L、INF-α、IFN-βRNA明显降低（P<0.05）,NEDD4L蛋白表达量明显降低;敲低Lnc-ALPK2,细胞中NEDD4L、INF-α、IFN-β基因明显上调（P<0.05）,NEDD4L蛋白表达显著升高。结论:1.CVB3感染可诱导细胞内Lnc-ALPK2的表达上调。2.Lnc-ALPK2作为促病毒因子,在CVB3感染过程中可促进CVB3复制。3.NEDD4L为Lnc-ALPK2调控的下游靶基因,Lnc-ALPK2通过与NEDD4L相互作用,抑制NEDD4L的表达,导致I型干扰素的表达下降进而促进CVB3复制。