槐花散合白头翁汤治疗急性放射性直肠炎大鼠的疗效及作用机制研究

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目的:观察中药复方槐花散合白头翁汤治疗大鼠急性放射性直肠炎的疗效,探讨其作用机制。方法:选用清洁级SD大鼠40只随机分为空白对照组(Control)、模型组(Model)、美沙拉嗪组(Mesalazine)、槐花散合白头翁汤组(BTW),每组10只。除Control组外其他三组大鼠盆腔均接受6MV-X射线20GY剂量照射,建立大鼠急性放射性直肠炎模型。待成模后每天给予相应药物灌胃治疗。灌胃后第14天处死所有大鼠,评估大鼠一般情况,HE染色法观察大鼠直肠黏膜组织病理学改变。通过16S r DNA测序技术检测ARP大鼠肠道菌群的变化。免疫印迹法(Western Blot)检测直肠组织中核转录因子-kappa B(NF-κB)、磷酸化核转录因子-kappa B(P-NF-κB)和TOLL样受体4(TLR4)的蛋白表达水平。免疫组织化学法(IHC)检测组织中磷酸化核转录因子-kappa B(P-NF-κB)和TOLL样受体4(TLR4)的蛋白表达水平。酶联免疫吸附法(Elisa)检测白介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的含量。所有数据采用SPSS 25.0统计软件进行分析,数据结果均以(?)±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验,以P<0.05为有统计学差异。结果:1.大鼠灌胃治疗后,观察各组大鼠一般征象,与Contol组比较,Model组评分显著升高(P<0.01),Mesalazine组和BTW组一般征象评分低于Model组(P<0.05),BTW组评分略低于Mesalazine组(P>0.05)差异无统计学意义,BTW组和Mesalazine组一般征象评分较Model组低。2.观察大鼠直肠HE病理染色切片,Model组上皮细胞变形稀疏,部分糜烂、坏死、脱落,黏膜及黏膜下层出现明显的空泡样变性,间质纤维增多,大量炎症细胞浸润。Mesalazine组和BTW组,直肠上皮细胞完整性较好,腺体结构改变较轻,直肠黏膜形态结构较好,无明显溃烂、出血和炎性细胞浸润。3.取大鼠粪便经16Sr DNA基因测序后,发现Control组和Mesalazine组乳杆菌物种丰度高于Model组。4.Western Blot结果显示与Control组比较,Model组TLR4、P-NF-κB蛋白表达显著上升(P<0.05)。Model组TLR4、P-NF-κB蛋白表达显著高于Mesalazine组和BTW组(P<0.05)。5.免疫组化结果显示与Model组胞膜及胞浆黄染明显加深,提示P-NF-κB和TLR4表达与Control组相比显著增高;而Mesalazine组和BTW组胞膜及胞浆黄染较模型组变浅,较Control组颜色稍深,表明BTW组的P-NF-κB和TLR4蛋白表达减少。6.ELISA结果显示与Control组比较,Model组大鼠血清中TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1表达显著上升,具有统计学差异(P<0.05),Mesalazine组和BTW组大鼠血清中TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1水平显著低于Model组,具有统计学差异(P<0.05)。结论:1.槐花散合白头翁汤能够有效改善大鼠直肠黏膜形态结构,减轻炎症反应,进而改善急性放射性直肠炎大鼠腹泻、黏液便、脓血便等症状。2.槐花散合白头翁汤可调节肠道菌群,增加乳杆菌的菌群丰度。3.槐花散合白头翁汤治疗大鼠急性放射性直肠炎的作用机制与抑制TLR4/NF-κB信号通路,减少炎症因子释放有关。
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