随着肿瘤诊断和治疗技术的发展,恶性肿瘤患者的生存率已经有了大幅提高。环磷酰胺是一种广泛应用于各类肿瘤治疗和免疫抑制治疗中的药物,环磷酰胺会导致卵巢中原始卵泡的过度激活和DNA损伤诱导的凋亡,引起卵巢储备下降,但接受了环磷酰胺治疗的患者仍然有机会可以生育后代。研究发现环磷酰胺的母源性暴露会导致出生后代的畸形率上升和子代表观遗传修饰的改变。本研究旨在探究环磷酰胺早期作用后对存活的卵母细胞造成的长期不良影响、造成这种效应的分子机制及可能的干预措施。我们构建了青春期环磷酰胺暴露的小鼠模型,对出生后21天的小鼠腹腔注射100mg/kg环磷酰胺一次,处理47天后少量存活的原始卵泡发育至有腔卵泡阶段时,注射PMSG（pregnant mare serum gonadotropin）和h CG（human chronic gonadotropin,h CG）从体内收集MII（Metaphase II）期卵母细胞,或后续进行体外受精及培养,首先分析了环磷酰胺早期暴露对卵母细胞核质成熟及早期胚胎发育的影响;之后收集完全生长的GV（germinal vesicle）期卵母细胞,进行体外减数分裂进程分析、单细胞测序、免疫荧光,解析环磷酰胺影响卵母细胞发育潜能的可能分子机制;最后探究了溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）在环磷酰胺化疗损伤中的保护作用。我们发现在环磷酰胺作用后,原始卵泡中的DNA损伤和过度激活效应会在几天内恢复至基线水平,但是卵巢内卵泡数目出现明显下降,卵巢储备受损。部分原始卵泡可以从环磷酰胺的急性损伤作用中存活下来并继续进入生长阶段。但是卵母细胞内部稳态受损,质量下降,表现为减数分裂异常,染色体非整倍性上升,同时伴随线粒体功能下降,内质网应激水平升高。环磷酰胺作用后的卵母细胞在受精后胚胎发育潜能下降,囊胚形成率降低。通过免疫荧光染色,我们发现在完全生长的GV期卵母细胞中,环磷酰胺作用组出现组蛋白修饰异常,表现为H3K4me3水平下降,H3K9me3水平上升,同时DNA去甲基化功能也出现了下降。完全生长的GV期卵母细胞单细胞测序结果表明:环磷酰胺作用后卵母细胞中出现大量母源因子和甲基化转移酶基因表达的下调,导致了卵母细胞功能和质量下降。在测序数据中,我们发现Yap1表达水平较高且差异显著,可能是介导卵母细胞受损的分子机制。体外添加LPA可以促进YAP1的入核,改善环磷酰胺引起的胚胎发育潜能受损。此外,LPA还可以在一定程度上挽救环磷酰胺作用后导致的卵母细胞减数分裂异常和线粒体功能下降。我们得出结论:早期环磷酰胺暴露的毒性效应在存活的原始卵泡发育过程中持续存在,造成卵母细胞生长过程中母源分子累积和表观遗传修饰建立异常,导致卵母细胞质量和胚胎发育潜能下降,LPA可部分挽救早期环磷酰胺暴露后的胚胎发育潜能。本研究不仅为环磷酰胺对卵母细胞的长期不良影响提供了证据,而且为临床生育力保护提供了新思路。