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固公果是彝族民间用药,来源于蔷薇科蔷薇属植物大花香水月季(Rose odorata Sweet var. gigantean(Coll.et Hemsl.)Rehd.et Wils),其根入药,性平、味酸,具有涩肠止泻的功效,常用于治疗腹泻、菌痢等疾病。就目前的研究报道来看,固公果有效部位不明确,药效学方面的研究也是空白。关于蔷薇属植物的研究报道很多,其中金樱子、委陵菜等的根、茎、叶提取物中含有萜类、鞣质和黄酮类等成分,具有很高的药理活性和药用开发价值。 本课题组前期已经从固公果根中分离出11种三萜类化合物和10种鞣质化合物,且经试验发现固公果根提取物对肠道致病菌的体外抑菌活性显著。临床上用于治疗大肠湿热蕴结所致的肠炎、痢疾的中成药—“肠舒片”,就是以固公果根为主要原料开发而成,但其制备工艺简单,且作用不稳定。 本课题基于上述理论和试验基础,首先对固公果药材不同部位中的总鞣质和总三萜含量进行测定,结果显示固公果茎与根中总鞣质和总三萜含量相当,其中总鞣质含量分别为5.28%和4.02%,总三萜含量均为1.19%;固公果叶中的总鞣质含量为7.95%,总三萜含量较低,为0.81%。 按照之前课题组对固公果根提取物提取工艺的优化条件,累积富集有效部位6个批次,每500 g固公果根原药得到固公果根提取物27.50 g,平均得率为5.50%。测得固公果根提取物中总三萜含量为37.91%、总鞣质含量达到58.47%;利用高效液相色谱法从中检识出原花青素B3、表没食子儿茶素(EGC)、儿茶素、表儿茶素、(-)-fisetinidol-(4α,8)-(-)-catechin、(4α,8)-(-)-fisetinidol-(-)-epicatechins以及(+)-guibourtinidol-(4β,8)-epicatechin7个单体化合物,并测得这7个化合物的含量分别为3.22、2.60、8.50、12.35、13.22、3.39、4.12 mg/g。 对固公果根提取物进行急性毒性试验,测得其LD50为18.69 g/Kg,是临床治疗平均剂量的670倍,证明其毒性甚微。观察固公果根提取物在治疗二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀方面的抗炎作用时,发现固公果根提取物高、中、低剂量组可显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀,且小鼠耳肿胀抑制率分别为40.25%、30.82%、27.67%,抑制作用显著;模型组大鼠足肿胀明显,约为5.7 mm。各给药组大鼠足肿胀度均有不同程度的降低,具有非常显著的差异。固公果根提取物高剂量组大鼠足肿胀度是3.3 mm,足肿胀抑制率为90.84%,消肿程度明显,与阳性药组药物阿司匹林效果相当。小鼠灌胃给予蓖麻油导致腹泻,固公果根提取物高、中、低剂量组总粪便抑制率分别为55.50%、53.85%和31.24%,湿粪便抑制率依次为73.33%、60.00%、55.76%,可显著减轻小鼠腹泻症状;而对于皮下注射新斯的明导致的小鼠腹泻,固公果根提取物剂量组的肠推进百分率为74.37±0.10%、70.50±0.05%和62.32±0.06%,说明在治疗蓖麻油和新斯的明所致小鼠实验性腹泻方面,固公果根提取物不仅可以缓解药物引起的肠蠕动加快,减短肠内容物在肠内的行进距离,还能减少湿粪便的形成。 固公果根提取物可以有效抑制乙酰胆碱刺激引起分段离体肠平滑肌的收缩现象,并对空肠和十二指肠抑制作用非常明显,抑制率可达到75%以上;与肠舒片相比,作用更为显著;同时我们还对其作用通路进行探索,在无钙Tyrode’s生理溶液中,固公果根提取物浓度大于0.16 mg/mL就可以显著抑制平滑肌收缩的振幅,能剂量依赖性拮抗CaCl2对肠管平滑肌的收缩作用,达到舒张肠平滑肌的作用,其作用效果与Ca2+通道阻断剂维拉帕米类似,从而推断其作用机制可能为抑制Ca2+内流,从而引起肠道平滑肌舒张;因此从药效学和试验通路探索两方面解释固公果根提取物在临床上具有固肠止泻的功效。 同时我们还考察了固公果根提取物对葡聚糖硫酸钠诱导溃疡性结肠炎的动物模型的作用效果,显示固公果根提取物在灌胃给药7天后可以缓解因溃疡性结肠炎导致的体重迅速减小、便血以及结肠萎缩等临床症状;同时组织形态学试验结果显示其可以有效降低实验性溃疡性结肠炎小鼠的炎症反应;用Elisa方法检测血液及组织匀浆中相关细胞因子的活性和含量,其中给药组SOD活力增强,而MPO、MDA、IL-10、TNF-α、COX-2等细胞因子的含量均降低,从分子生物学角度评价该药的作用效果。综合小鼠临床症状、组织切片和分子生物学结果,显示固公果根提取物有良好的治疗溃疡性结肠炎的功效。 综合上述研究结果发现,固公果根提取物不仅有良好的抗炎、抗腹泻效果,其在治疗溃疡性结肠炎方面也有很显著的功效。这些探索和数据不仅丰富了固公果的药理及药效学方面的研究报道,为其在临床应用方面提供理论指导,做到有据可依;而且为固公果的二次开发提供很好的技术导向和理论支持。