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独一味[Lamiophlomis rotata( Benth.) Kudo]是青藏高原特有的一种重要药用植物,广泛分布于西藏,在海拔3900-5100米的河滩地、石质高山草甸或风化的碎石滩上常能发现它的身影。其根及根茎或全草入药,具有多种功效例如:消肿止痛、止血、抗菌消炎、活血化瘀、增强免疫力等。然而目前独一味由于各产地及采收季节的不同而造成其品质的差异,而且其不同有效部位的抗炎镇痛比较也没有系统研究,其抗神经病理性疼痛作用及分子药理学机制尚未明确,因此本文通过体外细胞实验及建立相应的动物模型,研究不同产地独一味的质量及抗炎活性、不同有效部位抗炎镇痛的作用和独一味总环烯醚萜苷镇痛作用,并初步探究了其作用机制。 采用高效液相法(HPLC)测得八种不同产地和季节的独一味中山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯的含量,结果发现两种成分的含量差异很大,甚至产自鲁那菜康的独一味不符合药典标准。建立了脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,给予八种不同产地和季节的独一味乙醇提取物及对应药材中两种成分相同含量和比例的山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯混合物12小时后,用Griess试剂盒检测各组细胞的NO含量。结果表明不同药材的乙醇提取物与对应比例的混合物均具有相似的抗炎效果,进一步对炎性因子研究发现当这两种化合物的比例为1:1的时候抗炎效果最好。 分别采用角叉菜胶致大鼠足跖肿胀法、二甲苯致耳廓肿胀法和醋酸致热板测痛法、小鼠扭体反应探究独一味中三类有效部位的抗炎、镇痛活性。结果显示环烯醚萜苷类能明显使小鼠热板痛阈值增加,使在相同时间内的小鼠扭体次数减少,苯乙醇苷类和黄酮类作用较弱且与环烯醚萜苷类比较有显著性差异;环烯醚萜苷类对大鼠足跖肿胀和耳廓肿胀有明显作用,黄酮类也能一定程度抑制耳廓肿胀,而苯乙醇苷类的作用较弱。这一研究表明独一味三类主要有效部位中属环烯醚萜苷类抗炎镇痛效果较好,是独一味的主要药效部位。 环烯醚萜苷类是独一味抗炎镇痛作用的主要活性部位,然而它对神经性疼痛的影响较少见报道。本文运用加速转棒实验(Accelerating rotarod Test,ARR)和自主活动实验(Locomotor Activity Test)证实环烯醚萜苷类成分不影响大鼠运动神经和自主神经。通过建立保留性神经损伤(SNI)模型来研究环烯醚萜苷类成分对神经病理性疼痛的效应,连续给药14d。术前1d及术后隔日对每组均进行疼痛行为学观察,测量其机械性刺激反应阈值(PMWT)。并在14天后测定其脊髓背角处一氧化氮(NO),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β),白介素-10(IL-10),一氧化氮合酶(NOS)和环磷酸鸟苷(cGMP)的水平。采用RT-PCR技术检测蛋白激酶G-Ⅰ(PKG-Ⅰ),诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的变化,运用Western blot方法检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)和蛋白激酶Cγ(PKCγ)表达情况,并通过免疫组化法检测PKCγ免疫反应呈阳性的情况。结果显示独一味环烯醚萜苷能降低SNI大鼠PMWT,下调背角处NO,IL-1β, TNF-α,NOS,和cGMP的水平,上调IL-10水平。能降低iNOS、PKG-Ⅰ的mRNA表达量和NMDAR、PKCγ的蛋白表达量,并呈一定浓度梯度变化。结果表明独一味中环烯醚萜苷类具有一定的治疗神经性病理性疼痛作用。它可能是通过抑制NO/cGMP/PKG和NMDAR/PKC通路来发挥这一作用的。