近年来，随着城区绿化树木花草品种的不断增加，花粉过敏患者的数量亦有增加的趋势。桦树主要分布在北温带，是一种重要的园林绿化树种。然而在北欧、中欧、北美及亚洲的某些地区，山毛榉目一些树木如桦树、桤木、榛树、橡树、角树等的花粉是引起人们Ⅰ型超敏反应的主要原因。研究表明桦树花粉与某些食物过敏原之间还存在交叉反应，可能会影响人们的日常生活，因此对于桦树花粉主要致敏组分的研究具有重要的理论和现实意义。本文着重对桦树主要花粉致敏蛋白Bet v1-F/I的原核表达、纯化、鉴定进行研究，结合生物信息学方法深入分析其氨基酸组成性质、抗原表位区域，并对其过敏原性进行改造。　　 主要内容如下所述:　　 1、以欧洲白桦花粉主要过敏原Bet v1-F/I为研究对象，根据其在GenBank中的序列号(P43179)进行搜索获得其氨基酸及核苷酸序列。使用DNAstar软件对该蛋白的密码子进行优化，为便于蛋白的纯化，在核苷酸序列的C端添加StrepⅡ标签蛋白的序列，合成目的基因，构建pET44a/Bet v1F/I载体，表达了分子量为18.3kD的过敏原蛋白。对蛋白表达条件进行优化，结果显示，在37℃，IPTG浓度为0.3 mM，诱导4h的条件下重组蛋白的表达量最高。对蛋白进行亲和纯化，并进行Western Blot检测有明显特异性条带。　　 2、进一步对过敏原Bet v1-F/I的抗原表位进行预测，并对高抗原值表位进行改造，以期获得低过敏原性的致敏蛋白。通过在线软件NetMHCⅡ2.2分析Betv1-F/I蛋白与MHCⅡ分子的结合能力，获得抗原值较高的表位并通过设计突变引物，单位点突变的方式实现抗原值的改变。筛选出3个与MHCⅡ有较高结合能力的位点，分别将11位Ⅰ突变为W，80位F突变成P，及145位的R变为P均能降候选肽与MHCⅡ类分子的结合能力。构建表达了7个Bet v1-F/I突变体，经Western Blot鉴定在相应位置有明显的目的条带。　　 3、应用MEGA5.0软件对桦树主要花粉过敏原与其他的过敏原之间的同源性进行分析，并采用邻位相连法绘制了同源进化树。结果显示，Bet v1-F/I除了跟桦树花粉过敏原家族的成员有很高的同源性外，还与桤树主要花粉过敏原Alng1存在较高的同源性，这也就暗示两者之间可能存在交叉反应。　　 4、采用生物信息学软件DNAstar对Bet v1-F/I蛋白经二级结构、表面可极性、亲水性、可塑性、抗原指数等预测方案对其B细胞线性表位进行分析。结果表明可能的B细胞表位区域有23-30，42-62，76-82，87-102，115-142，154-159。利用SWISS-MODEL中的同源建模功能对Bet v1-F/I的空间结构进行预测，从其构象可以看出，该蛋白主要由α-螺旋，β-折叠构成。