口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的偶蹄类动物烈性传染病。口蹄疫病毒(FMDV)属于小RNA病毒科口疮病毒属,除了主要由病毒蛋白(VP)1至4的结构蛋白(SP)组成的病毒衣壳外,还包括L、2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D以及它们的前体等非结构蛋白(NSP)。NSP参与病毒的复制、多聚蛋白的裂解和病毒颗粒的组装过程。动物感染FMDV后,体内既能产生SP抗体,又能产生NSP抗体,而疫苗免疫动物主要诱导机体产生SP抗体,因此OIE推荐以NSP为抗原检测动物体内的NSP抗体区分FMDV感染动物和注射疫苗动物已经得到了广泛认可,最早检测到NSP抗体的时间对于识别感染动物,尽快采取防治措施,有效防控口蹄疫具有举足轻重的意义。NSP可与血清蛋白发生互作反应,互作体也可能是由靶标蛋白调节的底物或分子组分等组成的,识别给定蛋白质的互作蛋白能够提供关于蛋白质功能及其涉及的分子机制的线索。目前,市面上的FMDV诊断试剂盒杂乱,动物感染FMD后免疫球蛋白最早出现时间还不确定,NSP与猪血清互作蛋白还不清楚。本文通过三种不同厂家的试剂盒对人工感染FMDV的猪血清进行NSP抗体IgA、IgM、IgG含量的检测,得出不同免疫球蛋白最早出现时间以及不同时间点的含量变化;以3AB为诱饵蛋白,通过免疫共沉淀联合质谱技术对3AB与FMDV NSP阳性猪血清的互作蛋白进行鉴定,并对其蛋白功能进行了初步分析。结果显示,筛选出最适合FMDV NSP抗体检测的试剂盒A,并发现FMDV NSP IgG最早于第5天出现,IgA、IgM含量在FMDV感染3d后开始逐渐上升。通过免疫共沉淀联合质谱技术鉴定到3AB与FMDV NSP阳性猪血清的互作蛋白有81个,通过GO分析发现他们主要参与了对刺激的应答反应、生物调节、免疫系统反应、调节生物过程、细胞过程等重要生物学过程,集中分布在细胞外区域、细胞器、细胞外区域部分、细胞以及细胞的某一部分,具有结合、结构分子活动、分子功能调节因子、催化反应、信号转导活动等分子功能。通过KEGG Pathway分析,发现筛选出的差异蛋白主要参与金黄色葡萄球菌感染(Staphylococcus aureus infection)、PI3K-Akt信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)等信号通路。本研究通过人工感染FMDV的猪血清进行NSP抗体,得出不同免疫球蛋白最早出现时间以及不同时间点的含量变化,为进一步研究口蹄疫病毒复制和FMDV NSP抗体最早出现时间提供一定的科学依据。并通过免疫共沉淀联合质谱技术获得了与非结构蛋白互作的蛋白,为FMDV感染生物标识物的发现奠定基础。