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研究目 的本研究利用xTAG70plex液相芯片技术对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的快速现场评价(ROSE)细胞学制片进行EGFR和KRAS基因检测,目的在讨论以NSCLC患者的ROSE细胞学制片提供的细胞学标本为样本,应用xTAG70plex液相芯片技术检测其EGFR和KRAS基因突变状态的可行性及其临床价值。并讨论EGFR和KRAS基因突变状态与NSCLC患者的年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿瘤TNM分期等临床特征的关系。研究方法 收集于2016年6月—2017年6月就诊于天津医科大学总医院行支气管镜检查并最终病理诊断为NSCLC的患者,共收集了75例ROSE细胞学制片和配对的组织学标本,病理分类:腺癌61例,鳞状细胞癌14例。以ROSE技术指导气管镜取活检的过程,每位患者均制作ROSE细胞学制片。从取得的组织学标本和ROSE细胞学标本提取DNA,各基因外显子上含有常见等位基因型的基因片段多重PCR反应获得。核酸外切酶酶切及碱性磷酸酶(EXO-SAP)水解,去除多余的引物和dNTP。进行等位基因特异性引物延伸(allele specific primer extension,ASPE)反应。ASPE引物上的Tag序列与聚苯乙烯微球上的Anti-Tag序列特异结合进行杂交反应。杂交后的微球通过Luminex 200多功能流式点阵仪分析,读取每个样品的中位荧光值。应用SPSS 21.0软件进行分析,分别计算ROSE细胞学标本配对组织学标本EGFR和KRAS基因突变的敏感度、特异度、一致率。计数资料采用χ~2检验或Fisher确切概率法分析EGFR和KRAS基因突变状态与临床特征的关系,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 除1例在组织学标本检出为KRAS突变而在配对的ROSE细胞学标本没有检测出来的病例,其他病例基因突变检测结果均相同,两种标本EGFR基因突变检测结果一致率为100%,KRAS基因突变检测结果一致率为98.7%。本实验ROSE判读结果与最终病理诊断结果一致率高。本研究中EGFR和KRAS基因突变在NSCLC患者中阳性率分别为48%和9.3%。在组织学标本配对ROSE细胞学标本中同时检测出了相同的EGFR突变类型的36例中,EGFR基因突变高发于女性、非吸烟者和肺腺癌者(均P<0.05)。在组织学标本配对ROSE细胞学标本检测出的7例KRAS基因突变中,KRAS基因突变与年龄、吸烟史、病理学类型、肿瘤TNM分期均无相关性(均P>0.05),但KRAS基因突变高发于男性患者(P<0.05)。结论 xTAG70plex液相芯片技术检测ROSE细胞学标本和配对的组织学标本基因突变结果高度一致,xTAG70plex液相芯片技术可以有效地检测ROSE细胞学标本EGFR和KRAS的基因突变状态。因此,对于NSCLC患者,ROSE细胞学制片可以作为组织学替代标本进行EGFR和KRAS基因突变检测,并且此方法特别适用于没有多余组织学标本进行基因检测的晚期NSCLC患者,具有较高的临床价值。