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Dicer是一种高度保守的核糖核酸酶,在植物中称为Dicer-like(DCL)蛋白。Dicer/DCL的直接生物学功能主要是加工生成各种具有调控功能的小分子RNA,这些调控小RNA进一步影响其他相关蛋白基因的时空表达,进而影响生物个体的生长发育、抗病虫害能力和逆境适应能力等。因而,研究Dicer/DCL蛋白基因的功能对揭示真核生物的基因表达调控机理具有十分重要的意义。
本研究基于RNA干扰技术,对水稻OsDCL3b进行了转基因沉默分析,获得了影响稻穗生长发育的T2代转基因阳性纯合植株,发现OsDCL3b基因主要影响21nt和24nt大小的小RNA的生物合成,为深入研究OsDCL3b基因调控稻穗生长发育的遗传途径奠定了基础。
主要结果如下:
1、基于改造了的RNAi-Ubi质粒pYL,成功构建了OsDCL3b的转基因沉默载体,利用农杆菌介导转化水稻中花11,获得了转基因T2代阳性纯合株系。
2、荧光定量PCR比较分析发现,OsDCL3b基因在其中2个T2代转基因纯合株系DCL4-6和DCL6-1幼穗中的表达量分别比其在野生型中花11幼穗中的表达量减少了约30%和70%;大田种植成熟期表型分析结果表明,这2个T2代转基因纯合株系植株的结实率分别只有40.0%和37.7%,而野生型中花11的结实率高达91.7%,同时这2个T2代转基因纯合株系植株的每穗枝梗数和总粒数变少,穗长变短;表明OsDCL3b基因与稻穗的生长发育密切相关。
3、对DCL6-1和对照中花11幼穗中大小为21~36nt的小RaNA进行测序比较分析发现,OsDCL3b基因主要影响21nt和24nt大小的小RNA的生物合成;这些小RNA在水稻第2号染色体上分布最多,分别占总数的32.9%(DCL6-1)和24.3%(对照中花11),在水稻其他染色体上的分布量均未到总数的10.0%。