杨树是世界主要的造林和经济树种,在中国和世界各地均有广泛的栽培?格林一号黑杨(G1)是一种欧美杂交杨,具有生长速度快?材质好?适应性强等优点,为目前推广的主要品系之一?本研究选择G1黑杨作为转基因的实验材料,研究了激素浓度等因素对其叶片再生?壮苗?生根等的影响,建立了杨树高频再生体系?几丁质和葡聚糖是许多病原真菌细胞壁结构的重要组成部分?几丁质酶可以将几丁质水解为N-乙酰氨基葡萄糖;β-1,3-葡聚糖酶可以将葡聚糖降解为葡萄糖?大量研究表明,以上两种酶在植物体内体外,对病原真菌的生长均有明显的抑制作用?本研究将这两种酶的编码基因分别构建植物表达载体,以G1黑杨幼叶为外植体,利用改良的农杆菌介导法进行转化,获得转基因植株?具体实验结果如下:1.建立了格林一号黑杨(G1)离体叶片的高频再生体系?研究结果表明,不同的激素浓度配比对格林一号黑杨组培苗的生长?分化?再生?生根等方面有重要影响?通过不同激素浓度配比的实验,确定了最佳壮苗培养基(MS + 0.15mg/L 6-BA + 0.1mg/L NAA + 0.1mg/L KT + 20mg/L Ad)叶片再生培养基(MS + 0.5mg/L 6-BA + 0.1mg/L NAA)?和生根培养基(1/2 MS + 0.1mg/L NAA)?pH值?琼脂浓度?温度?湿度等其他物理因素也有影响?2.改良和优化了传统的农杆菌介导的转基因方法,实验证明,采用这种方法具有很高的转化率,同时有效的抑制了农杆菌的生长?用连续转化的方法,将几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因依次转入植物体中?最终获得了大量转基因植株?3.通过PCR?PCR-Southern等一系列分子生物学手段检测再生转化植株,证明两个基因已经整合到植物体的基因组中?4.转基因植株的细胞粗提液在体外可以有效的抑制杨树病原真菌的<WP=11>生长,转入两个基因的样品抑制效果最明显强于单独转一个基因的样品,未转基因植株不能抑制?证明转基因植株对真菌病害有抵抗作用?