基于毒邪致病理论探讨清热解毒法调控巨噬细胞极化抗AS的作用研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wfzhousd
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目的:通过观察“丹蒌片加栀子、连翘”对ApoE-/-小鼠的血脂水平、形态学变化以及巨噬细胞极化相关指标的影响,探讨“清热解毒法”调控巨噬细胞极化对抗动脉粥样硬化的作用及机制,为临床应用提供科学的实验依据。材料与方法:40只SPF级健康AopE-/-小鼠,自由摄食饮水,适宜性喂养1周,随机分成5组,对照组、模型组、丹蒌片组、丹蒌片加栀子、连翘组和辛伐他汀组,每组8只。对照组小鼠每日普通饲料喂养,模型组、丹蒌片组、丹蒌片加栀子、连翘组以及辛伐他汀组每天给予高脂饲料喂养,自由摄食,饮水不限。喂养8周,模型组、丹蒌片组、丹蒌片加栀子、连翘组和辛伐他汀组继续高脂饲料喂养,同时进行药物干预,灌胃给药,给药剂量按等效剂量折算系数换算,丹蒌片组生药量浓度为0.03g/mL,0.2mL早晚2次灌胃;丹蒌片加栀子、连翘组生药量浓度0.03g/mL+0.06g/mL+0.08g/mL,0.2mL早晚2次灌胃;辛伐他汀组浓度0.26mg/mL,每晚1次灌胃;对照组与模型组每天对小鼠进行相同体积的生理盐水灌胃。治疗4周,检测AopE-/-小鼠血清中血脂TC、TG、LDL、HDL水平;苏木素-伊红(HE)染色方法检测每组AopE-/-小鼠主动脉组织发生动脉粥样硬化的形态学改变;Western Blot方法检测小鼠主动脉中p-STAT1、STAT1、p-STAT6、STAT6、iNOS、TGF-β蛋白表达以及qRT-PCR技术检测IL-1β、MMP-2、MMP-9、IL-10、IL-4、Arg-1mRNA表达。结果:1.血脂检测结果显示:与对照组比较,模型组血清中TC、TG、LDL水平显著升高(P<0.05);HDL水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,丹蒌片组、丹蒌片加栀子、连翘组和辛伐他汀组血清中的TC、TG、LDL水平显著降低(P<0.05);HDL水平显著升高(P<0.05)。2.HE染色结果显示:与对照组比较,模型组有炎性细胞浸润、肥大细胞增多,形成泡沫样细胞,斑块面积明显;与模型组比较,丹蒌片组、丹蒌片加栀子、连翘组和辛伐他汀组斑块面积明显减少。3.Western Blot检测小鼠主动脉p-STAT1、STAT1、p-STAT6、STAT6、iNOS、TGF-β蛋白表达结果显示:与对照组比较,模型组小鼠主动脉中的p-STAT1/STAT1、iNOS蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,丹蒌片组、丹蒌片加栀子、连翘组和辛伐他汀组p-STAT1/STAT1、iNOS蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与对照组的比较,模型组p-STAT6/STAT6、TGF-β蛋白表达水平显著下降(P<0.05);与模型组比较,丹蒌片组、丹蒌片加栀子、连翘组和辛伐他汀组p-STAT6/STAT6、TGF-β蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。4.q RT-PCR技术检测小鼠主动脉IL-1β、MMP-2、MMP-9、IL-10、IL-4、Arg-1mRNA表达水平结果显示:与对照组比较,模型组小鼠IL-1β、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达水平显著升高(P<0.05);与模型组的比较,丹蒌片组、丹蒌片加栀子、连翘组以及辛伐他汀组IL-1β、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平显著降低(P<0.05);与对照组比较,模型组IL-10、IL-4、Arg-1 mRNA的表达水平显著下降(P<0.05);与模型组比较,丹蒌片组、丹蒌片加栀子、连翘组和辛伐他汀组IL-10、IL-4、Arg-1 mRNA表达水平显著上升(P<0.05)。结论:1.高脂饲料能导致AopE-/-小鼠脂质代谢紊乱,引发动脉粥样硬化。2.巨噬细胞极化参与了动脉粥样硬化的过程。3.“清热解毒法”改善Apo E-/-小鼠主动脉损伤机制可能与调控巨噬细胞M1型向M2型极化有关。
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