目的：糖尿病已成为威胁人类健康与生命的重要杀手之一。糖尿病患者中将近95%是2型糖尿病（type2diabetes mellitus，T2DM）患者，T2DM会引起全身并发症，其中心脏并发症是糖尿病患者高病死率的主要原因。而糖尿病心脏并发症重要机制之一是氧化应激。氧化应激发生是由于组织细胞中活性物质——主要包括活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）和活性氮簇（reactive nitrogen species，RNS）产生过多，超过了抗氧物质的清除能力，致使生物大分子（包括脂质、糖、蛋白质与DNA）氧化。糖尿病时，高血糖长期持续刺激，使组织中活性物质生成增多，抗氧化系统功能下降，氧化与抗氧化失衡而产生氧化应激。二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid, DHA）是n-3系多不饱和脂肪酸（n-3Polyunsaturated fatty acids, n-3PUFAs），具有抗氧化性，并且具有预防糖尿病心脏并发症的作用。那么，DHA是否对T2DM大鼠心肌中的氧化应激有改善作用？未见报道。基于上述目的，本实验以2型糖尿病大鼠为研究对象，在有无DHA喂养的情况下，观察大鼠心肌组织中的氧化应激以及组织中抗氧酶的活性，为DHA用于2型糖尿病心脏并发症的防治提供实验依据。方法：1动物分组及取材以本研究组侯连国等人制备的2型糖尿病大鼠的心肌为材料。实验动物分为对照组，糖尿病组和糖尿病+DHA组（以下简称DHA组），取各组心肌用于活性氧簇（ROS）含量、总抗氧能力（total antioxidant capacity,T-AOC）、糖化终末产物（advanced glycation end products, AGEs）含量、蛋白质羰基化产物（protein carbonyl groups, PCG）含量、丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量、4-羟基壬烯醛（4-hydroxynonenal,4-HNE）含量、4-羟基己烯醛（4-hydroxy-2-hexenal,4-HHE）含量及抗氧酶活性的测定。2T2DM大鼠心肌氧化应激水平的测定2.1总抗氧化能力（T-AOC）测定组织中抗氧化物质能使Fe³⁺还原成Fe2+，后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物，通过比色法可测出其抗氧化能力的高低。结果以每毫克样本蛋白含有的抗氧化物质单位表示（U/mg prot）。2.2活性氧簇（ROS）含量测定取不同组的实验组心肌切片进行ROS荧光探针－二氢乙啶（dihydroethidium, DHE）染色，根据荧光显微镜下红色荧光的产生，测定平均光密度值（integrated optical density, IOD），来判断各组ROS含量的多少和变化。2.3糖化终末产物（AGEs）含量测定酶联免疫吸附剂测定法进行测定，结果以每微克样本蛋白含有的糖化终末产物的纳摩尔数表示（nmol/μg prot）。2.4蛋白质羰基化产物（PCG）含量测定采用以2，4-二硝基苯肼比色法进行测定，结果以每毫克样本蛋白含有的蛋白质羰基化产物的纳摩尔数表示（nmol/mg prot）。2.5丙二醛（MDA）含量的测定采用硫代巴比妥酸（TBA）比色法进行测定，结果以每毫克样本蛋白含有的丙二醛的纳摩尔数表示（nmol/mg prot）。3T2DM大鼠心肌抗氧酶活性的测定3.1总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性的测定使用黄嘌呤氧化酶法，测定组织中SOD对超氧阴离子自由基的抑制率，计算被测样品SOD活力。结果以每毫克样本蛋白含有的酶活性单位表示（U/mg prot）。3.2铜锌-超氧化物岐化酶（CuZn-SOD）活性的测定使用黄嘌呤氧化酶法，测定组织中SOD对超氧阴离子自由基的抑制率，计算被测样品SOD活力。再用特异性抑制剂抑制Mn-SOD活性，可得到CuZn-SOD的活性，结果以每毫克样本蛋白含有的酶活性单位表示（U/mg prot）。3.3谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的测定GSH和二硫代二硝基苯甲酸作用，生成5-硫代二硝基苯甲酸阴离子呈现较稳定的黄色，用比色法测定吸光度值，计算单位时间内消耗的GSH的量，再计算GSH-Px的活性，结果以每毫克样本蛋白中含有的酶活性单位表示（U/mg prot）。3.4过氧化氢酶（CAT）活性的测定CAT分解H2O2的反应可以通过加入钼酸铵而迅速终止，剩余的H₂O₂与钼酸铵作用产生淡黄色络合物，比色法测定其生成量，计算CAT活力。结果以每毫克样本蛋白含有的酶活性单位表示（U/mg prot）。4. T2DM大鼠心肌组织中n-3与n-6系脂肪酸代谢产物变化4.14-羟基壬烯醛（4-HNE）含量的测定利用免疫组化方法，分别对正常对照组、糖尿病组和DHA组的组织切片进行4-HNE抗体染色，荧光显微镜扫描图片，对抗体分布光密度值进行测定，结果用各组IOD值平均数表示。4.24-羟基己烯醛（4-HHE）含量的测定利用免疫组化方法，分别对正常对照组、糖尿病组和DHA组的组织切片进行4-HHE抗体染色，荧光显微镜扫描图片，对抗体分布光密度值进行测定，结果用各组IOD值平均数表示。结果：1DHA改善了T2DM大鼠心肌氧化应激水平1.1总抗氧能力（T-AOC）（U/mgprot）对照组1.48±0.11，糖尿病组1.16±0.15，DHA组1.54±0.39。糖尿病组与对照组相比，糖尿病大鼠心肌中总抗氧能力明显降低（P<0.05）；DHA组与糖尿病相比，心肌中总抗氧能力明显增强（P<0.05）。而对照组与DHA饮食组没有统计学差异（P>0.05）。表明DHA增强了糖尿病大鼠心肌的总抗氧能力。1.2活性氧簇（ROS）含量（IOD）对照组3.97±0.23，糖尿病组13.38±1.42，DHA组5.23±0.74。糖尿病组与对照组相比，糖尿病大鼠心肌中活性氧簇的含量明显升高（P<0.05）；DHA组与糖尿病相比，DHA组大鼠心肌组织中，活性氧簇的含量明显降低（P<0.05）。与对照组相比，DHA组心肌中ROS含量没有差别（P>0.05）。表明DHA降低T2DM大鼠心肌的ROS。1.3糖化终末产物（AGEs）含量（nmol/μg prot）对照组0.11±0.009，糖尿病组0.14±0.008，DHA组0.12±0.007。糖尿病组与对照组相比，糖尿病大鼠心肌中糖化终末产物的含量明显升高（P<0.05）；DHA组与糖尿病相比，DHA组大鼠心肌组织中，糖化终末产物的含量明显降低（P<0.05）。与对照组相比，DHA组心肌中AGEs含量无差别（P>0.05）。表明DHA有效改善了糖尿病大鼠心肌组织中的糖过氧化水平。1.4蛋白质羰基化产物（PCG）含量（nmol/mg prot）对照组3.79±0.34，糖尿病组5.22±0.67，DHA组3.80±0.39。糖尿病组与对照组相比，糖尿病大鼠心肌中蛋白质羰基的含量明显升高（P<0.05）；DHA组与糖尿病相比，DHA组大鼠心肌组织中，蛋白质羰基的含量明显降低（P<0.05）。而对照组与DHA饮食组没有统计学差异（P>0.05）。表明，DHA有效改善了糖尿病大鼠心肌组织中的蛋白质过氧化水平。1.5丙二醛（MDA）含量（nmol/mg prot）对照组1.18±0.05，糖尿病组1.26±0.09，DHA组1.54±0.18。糖尿病组与对照组相比，糖尿病大鼠心肌中MDA的含量增加（P<0.05）；DHA组与对照组相比，DHA组大鼠心肌组织中，MDA含量明显增加（P<0.05）。表明，给予糖尿病大鼠DHA后，心肌组织中脂质过氧化增强。2DHA对T2DM大鼠心肌抗氧酶的活性影响不大2.1总超氧化物岐化酶（T-SOD）活性（U/mg prot）对照组147.74±27.31，糖尿病组142.98±23.54，DHA组138.69±24.40。糖尿病组与对照组相比，大鼠心肌T-SOD活性降低，但结果没有统计学差异。DHA组与糖尿病组相比，差异没有统计学意义。表明，DHA对糖尿病大鼠心肌中的T-SOD活性没有影响。2.2铜锌-超氧化物岐化酶（CuZn-SOD）活性（U/mg prot）对照组92.81±10.09，糖尿病组94.81±19.63，DHA组96.61±15.70。各组之间没有统计学差异。表明，DHA对糖尿病大鼠心肌中的CuZn-SOD活性没有影响。2.3谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性（U/mg prot）对照组171.73±19.83，糖尿病组139.23±11.60，DHA组134.39±22.13。糖尿病组与对照组相比，DHA组与糖尿病组相比，心肌组织中GSH-Px活性的差异均没有统计学意义（P>0.05）。表明，DHA对糖尿病大鼠心肌中的GSH-Px活性没有影响。2.4过氧化氢酶（CAT）活性（U/mg prot）对照组10.50±1.30，糖尿病组17.94±3.93，DHA组16.74±1.91。糖尿病组与对照组相比，糖尿病大鼠心肌中CAT的活性升高（P<0.05）；DHA组与糖尿病组相比，DHA组大鼠心肌中CAT的活性没有太大的变化。表明，DHA对糖尿病大鼠心肌中的CAT活性没有影响。3DHA分别降低和增加了T2DM大鼠心肌组织中n-3和n-6系脂肪酸氧化产物3.14-羟基壬烯醛（4-HNE）含量（IOD）对照组7.90±0.54，糖尿病组17.65±1.27，DHA组5.93±0.53。糖尿病组与对照组相比，糖尿病大鼠心肌中4-HNE的含量明显增高（P<0.05）；与正常组相比，DHA组大鼠心肌组织中，4-HNE含量降低（P<0.05）。糖尿病组较DHA组4-HNE含量升高明显（P<0.01）。表明，DHA降低糖尿病大鼠心肌中n-3PUFAs的氧化，减少了4-HNE的产生。3.24-羟基己烯醛（4-HHE）含量（IOD）对照组1.06±0.13，糖尿病组4.58±0.44，DHA组16.50±0.93。糖尿病组与对照组相比，糖尿病大鼠心肌中4-HHE的含量增加（P<0.05）；DHA组与对照组相比，DHA组大鼠心肌组织中，4-HHE的含量明显增加（P<0.01）。表明DHA组大鼠心肌DHA氧化增多，产生大量的代谢产物4-HHE。综上所述，饮食中添加DHA有效改善T2DM大鼠心肌中氧化应激，DHA的自身氧化很可能是其改善氧化应激的途径之一。结论：1DHA能够改善2型糖尿病大鼠心肌中的氧化应激。2DHA可作为非酶类抗氧剂保护心肌免受氧化物的损伤。