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研究背景过敏性哮喘被认为是Th2免疫应答占优势的Th1/Th2失衡的复杂疾病。研究发现Th2类型的细胞因子，如IL-4、IL-5、IL-13能促进和维持哮喘的症状，在哮喘的发病过程中具有关键的作用，已成为抗哮喘治疗的靶点。但归因于哮喘发病中存在的复杂的信号补偿机制，仅仅将单个Th2类型细胞因子，例如IL-4，作为哮喘治疗靶点的生物制剂在临床实验中均未取得显著效果。已有报道显示，某些微生物病原体的产物具有激活固有免疫系统，进而调节Th1/Th2免疫应答失衡的能力，在抗哮喘研究中具有很大潜力。本研究假设，同时应用具有上调Th1免疫应答能力的幽门螺旋杆菌中性粒细胞激活蛋白（HP-NAP）和具有阻断IL-4生物学功能的可溶性白介素4受体（sIL-4R），去调节多个与哮喘发病机制相关的Th1或Th2类型细胞因子，可能获得更好的抗哮喘效果。本研究成功构建了融合表达sIL-4R和HP-NAP的质粒PSN，在OVA诱导的哮喘小鼠模型上对其抗哮喘效果进行了评估并探讨了相关抗哮喘机制。方法1.构建融合表达HP-NAP和sIL-4R的质粒pcDNA3.1-sIL-4R-NAP（命名为PSN），HP-NAP和sIL-4R编码基因用柔性肽（GSGGSG）的编码序列相连。质粒PSN瞬时转染COS-7细胞，RT-PCR及Western Blot鉴定融合蛋白sIL-4R-NAP的表达。2.建立OVA诱导的BALB/c小鼠哮喘模型，用于评估质粒PSN的抗哮喘效果及探讨其作用机制。3.最后一次OVA雾化处理24小时后，处死小鼠，进行支气管肺泡灌洗，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞总数、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞数目。并进行肺组织切片H&E染色，评估气道炎症情况。4. ELISA检测BALF中IL-4和IFN-γ的表达水平和血浆中OVA特异性IgE的浓度。5. qRT-PCR检测小鼠肺组织中与哮喘发病相关的细胞因子（IL-5、IL-12、IL-13）、趋化因子（eotaxin-1、eotaxin-2、CXCL2、CXCL5）及炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-17A）的mRNA水平。6. qRT-PCR检测肺组织中与免疫抑制相关的IL-10和Foxp3的mRNA水平。结果1. RT-PCR和Western Blot结果显示HP-NAP和sIL-4R以融合蛋白（sIL-4R-NAP）的形式表达于COS-7细胞中，并可分泌到细胞外。2.质粒PSN能明显减轻小鼠哮喘症状、肺部炎症显著减弱。BALF细胞总数及BALF中嗜酸性粒细胞数目显著减少，中性粒细胞数目无明显改变。3.质粒PSN显著降低Th2类型细胞因子（IL-5、IL-13）和嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin-2的mRNA水平，但对中性粒细胞趋化因子（CXCL2、CXCL5）、炎症因子（IL-6、TNF-α、IL-17A）以及免疫抑制相关因子（IL-10、Foxp3）的mRNA水平未产生明显的影响。4.质粒PSN显著提升BALF中IFN-γ的表达水平，显著降低BALF中IL-4和血浆IgE水平。结论质粒PSN能逆转Th2免疫应答占优势的Th1/Th2漂移、显著抑制气道炎症、减少BALF的细胞总数和嗜酸性粒细胞数目、极显著的降低血浆IgE水平和肺组织中嗜酸性粒细胞趋化因子eotaxin-2的mRNA水平。但质粒PSN不影响中性粒细胞在BALF中所占百分比、不影响肺组织中炎症因子的mRNA水平，并且其抗哮喘效果不依赖Treg亚群的免疫抑制作用。