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目的:前列腺癌是泌尿生殖系统中常见的恶性肿瘤之一。在美国,其发病率已超过肺癌,成为危害男性健康的首位因素。在我国,由于前列腺活检技术的提高,前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)筛查的普及以及生活方式的改变,前列腺癌的发病率呈迅猛上升趋势。综合治疗通常能为早期前列腺癌患者带来相对良好的预后,然而依然存在相当一部分前列腺癌患者在发生远处转移后才得以确诊,导致预后不佳。中晚期前列腺癌患者虽然可通过接受内分泌治疗控制和改善病情,但大多数前列腺癌患者最终会发展成预后极差的以转移为特征的去势耐药形式。F-肌动蛋白等细胞骨架成分在维持上皮完整性中起着重要作用。因此,其解除管制是癌症发展的主要原因。我们前期的研究表明,肌切蛋白(scinderin,SCIN)在低分化癌组织中高表达。本研究旨在探讨其对细胞增殖的调节机制。方法:(1)在本研究中,我们通过细胞转染、RNA抽提和实时定量PCR法(qRT-PCR)测定前列腺癌样本中SCIN的表达。(2)用短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)慢病毒干扰技术敲低SCIN在前列腺癌样本细胞中的表达,并用蛋白印迹法和基因芯片技术,检测受SCIN敲低影响显著的相关蛋白和基因表达。(3)通过MTT法检测PC3/DU145细胞转染SCIN小干扰RNA后对表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激细胞存活率的改变,来评估SCIN对EGF刺激细胞存活的影响。(4)通过Annexin V细胞凋亡试验,同时结合基因芯片数据分析,寻找与敲低SCIN后促进前列腺癌样本细胞凋亡相关的凋亡途径分子。(5)通过小鼠体内致瘤性测定检测SCIN对前列腺癌移植瘤生长的影响。实验按照对去势抵抗性前列腺癌样本细胞进行的不同处理分组:shSCIN组(转染SCIN干扰序列),shCon组(转染空载组)。最后用统计学方法对实验数据进行处理,分析SCIN与去势抵抗性前列腺癌病理进程间的关系。结果:(1)与正常前列腺组织相比,前列腺癌样本中SCIN表达普遍升高。(2)与shCon组相比,shSCIN组中两种癌细胞系的mRNA和蛋白水平明显降低。我们还进一步发现表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)和RPS6KA2的表达受SCIN调控,EGFR及其下游的MEK/ERK信号通路可能受SCIN的影响。(3)MTT法检测结果显示,50 ng/mL的EGF对shCon细胞组细胞增殖有显著促进作用,而在shSCIN组中无作用。此外,EGF还上调了shCon细胞中MEK(p-MEK)和ERK(p-ERK)的磷酸化,而SCIN基因敲低则减弱了EGF对MEK/ERK信号通路的影响。然而,SCIN基因敲低不影响p-Akt。(4)在Annexin V细胞凋亡试验中,shSCIN组早期和晚期细胞凋亡率较shCon组显著增加。基因芯片数据分析表明,shSCIN组中多种凋亡途径分子被上调。独立细胞实验表明在SCIN缺失的PC-3和DU 145细胞中Fas和Fas配体(FASLG)mRNA的表达水平明显增加。与shCon组相比,shSCIN组中PC-3和DU 145细胞裂解的细胞色素C、caspase 9、caspase 3和PARP的水平均增高。此外,shSCIN组两种细胞系中Bcl-xl蛋白水平均下降。(5)相较shCon组,shSCIN组小鼠移植瘤的生长明显延缓。结论:我们认为SCIN通过稳定EGFR和MEK/ERK信号来促进去势抵抗性前列腺癌细胞的存活,敲低SCIN可以减少表皮生长因子受体的表达,促进去势抵抗性前列腺癌细胞的凋亡。