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目的:验证肝癌细胞肝素酶(HPSE)诱导微血管内皮细胞坏死性凋亡;并探究肝素酶(HPSE)和半胱氨酸蛋白酶8(caspase-8)在其中的作用及机制。方法:使用HPSE RNAi慢病毒转染HCCLM3细胞株来敲减HPSE,利用qPCR和Western-Blot实验来验证转染效率。用transwell实验检测肝癌细胞迁移能力。将HCCLM3肝癌细胞与脐静脉内皮细胞HUVEC共培养,利用流式凋亡实验检测内皮细胞死亡率,电镜观察死亡方式。总共分成四组,非共培养组(HUVEC单纯培养组,Blank组)、HPSE mock组、HPSE RNAi组和NEC-1组,用ELISA实验检测上清液HPSE、TNF-ɑ和caspase-8的含量,用Western-Blot实验检测RIP1、RIP3、MLKL和caspase-8的表达。通过裸鼠腹腔转移模型的HE染色实验和蛋白荧光双标实验验证肝癌细胞的微血管侵犯。结果:1、HPSE RNAi慢病毒转染HCCLM3细胞后HPSE基因转录和蛋白表达水平均显著低于mock组(P<0.05)。2、transwell实验显示降低HPSE表达可抑制肝癌细胞迁移能力(P<0.05 vs mock)。3、流式凋亡实验结果显示HUVEC细胞与HCCLM3细胞共培养48h后细胞死亡增加(P<0.05),电镜结果显示共培养死亡细胞有坏死性凋亡特征。4、ELISA实验结果显示非共培养组和HPSE RNAi组上清液TNF-ɑ和HPSE水平比共培养组降低(P<0.05 co-culture vs Blank、P<0.05 HPSE RNAi vs co-culture),Western-Blot实验结果显示非共培养组、HPSE RNAi组和NEC-1组RIP1、RIP3、MLKL和caspase-8蛋白的表达比共培养组降低(P<0.05 co-culture vs Blank、P<0.05 HPSE-RNAi vs co-culture、P<0.05 NEC-1 vs co-culture)。5、裸鼠腹腔转移模型中HE染色未能发现明显的肝脏内微血管侵犯,荧光双标实验结果显示HPSE RNAi组和NEC-1组p-MLKL表达比HCC组降低(P<0.05 HPSE-RNAi vs HCC、P<0.05 NEC-1 vs HCC)。结论:降低HPSE表达能抑制肝癌细胞迁移能力。HUVEC细胞与HCCLM3肝癌细胞共培养后发生了坏死性凋亡,HPSE诱导了坏死性凋亡,并需要caspase-8的抑制。下调HPSE通过调节TNF-ɑ能抑制这种坏死性凋亡。