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G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors,GPCRs）是一类具有7次跨膜螺旋的膜蛋白受体,长期以来,GPCRs被认为是以单体形式存在并发挥作用,然而近来研究发现,GPCRs不仅能以二聚体或寡聚体形式存在,而且聚集体形式在其跨膜信号传导过程中发挥着关键作用。目前对于GPCRs是否普遍存在聚集现象,以及GPCRs聚集体的功能和生物学意义还不清楚,而且关于人趋化因子受体3（Human chemokine receptor type 3,CCR3）的聚集现象还未见有报道。本论文以人CCR3为研究对象,从体内活细胞和体外表面活性剂溶液两个角度对其聚集现象进行了研究。首先,我们利用增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,EGFP）载体,构建了CCR3-EGFP重组表达载体,优化了使用聚乙烯亚胺（Polyethyleneimine,PEI）介导的哺乳动物细胞瞬时转染表达条件,获得的最优条件为:使用HEK293人胚肾细胞（Human embryonic kidney 293,HEK293）,转染时细胞密度为80%,6孔细胞培养板每孔细胞转染DNA量为4μg（2μg/mL）,转染用PEI与DNA质量比为3:1,瞬转后继续培养48h收获细胞。在此转染条件下,细胞转染效率约为60%。然后,我们利用增强型青色荧光蛋白（Enhanced cyan fluorescent protein,ECFP）和增强型黄色荧光蛋白（Enhanced yellow fluorescent protein,EYFP）载体,构建了CCR3-ECFP和CCR3-EYFP两种重组表达载体,并在HEK293细胞内进行瞬时转染表达。荧光成像分析表明,CCR3荧光蛋白同时表达分布在细胞膜和细胞质中。荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer,FRET）分析结果发现,活细胞水平上CCR3-ECFP与CCR3-EYFP之间发生了荧光共振能量转移,证明了CCR3存在聚集现象,FRET比值为最大值一半时,受体与供体的比值约为0.6。接着我们还系统考察了CCR3内源性激动剂CCL11（C-C motif chemokine 11）和CCL24（C-C motif chemokine 24）,以及中性激动剂SB297006和SB328437对CCR3在活细胞水平上聚集过程的影响。在本论文的研究方法及条件下,我们发现,不同激动剂类型、激动剂作用浓度以及作用时间对CCR3活细胞水平上的聚集过程都没有明显的影响,这说明CCR3聚集现象与配体结合可能没有必要的联系,其聚集不受配体结合的调控。同时,我们利用本实验室构建并保存的人CCR3的T-REx-293稳定转染细胞系,进行了细胞扩大培养和CCR3诱导表达,之后采用Ni亲和层析和体积排阻层析获得到了纯度较高的CCR3蛋白。接着利用Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 647两种染料分别对纯化获得的CCR3蛋白进行N端单标记,并在表面活性剂溶液中检测CCR3的体外聚集现象。结果发现,荧光标记的CCR3蛋白在体外表面活性剂溶液中同样存在聚集现象,通过体外FRET分析,获得了其聚集过程中的表观速率常数k为3.96×10-4 s-1。本论文同时在活细胞水平及体外表面活性剂环境中,对人趋化因子受体CCR3的聚集现象进行了研究,证明了CCR3聚集现象的存在,并对聚集现象进行了初步的表征分析,从而为更清楚认识GPCRs聚集机理及其生物学意义提供了重要的实验数据,也为相关药物设计及疾病治疗提供了重要的理论依据。