植物microRNA(miRNA)是一类长18-24nt的非编码RNA,它们参与调控植物的生长发育,生殖与基因组重组,同时,microRNA也在植物响应生物和非生物胁迫、增强耐受能力过程中起着非常重要的作用。黑斑病是三七生长过程中最容易受到的灾害之一,常因此造成不可估量的经济损失。目前关于黑斑病的研究多集中在致病菌的生理生化特性及综合防治等方面,而从非编码RNA的角度探讨抗性microRNA鲜有报道。本文以期通过分析高通量测序数据,即小RNA测序技术,转录组测序技术,降解组测序技术,联合分析在三七中挖掘、鉴定由microRNA介导响应病害胁迫所参与调控的microRNA,为拓展对microRNA在药用植物抗病调控中的认识,并挖掘相关抗性microRNA标记,有望为高品质三七育种奠定基础。本课题的研究结果如下:1、鉴定了共得到响应黑斑病的277个含有前体序列的microRNA,其中有130个含有前体序列的microRNA已经被报导,81个含有前体序列的microRNA在22个保守microRNA家族中;2、SeqTar程序、CleaveLand程序作对比,预测保守microRNA的靶基因,结果显示SeqTar程序预测结果更为准确,其预测共得到了123个(碱基错配在4以下)在20个保守microRNA家族中的靶基因;3、另外,得到了7对负相关的保守microRNA与其靶基因,相关荧光定量PCR实验得到验证其负相关关系的准确性,这7对保守microRNA的靶基因多为ARF,GRF,CSD等转录因子,参与调控植物抗病性反应。本研究首次利用高通量多组学测序数据(转录组测序,小RNA测序,降解组测序)进行黑斑病胁迫诱导下三七中microRNA的鉴定及其功能分析,并通过昆明理工大学非编码RNA课题组开发的方法进行预测和分析,探讨黑斑病胁迫诱导下,随着时间的变化,三七中microRNA用来响应胁迫的表达变化情况;首次研究病害胁迫下药用植物三七中的抗性microRNA,作为抗性分子标记,有望为筛选抗病性高品质三七育种研究奠定一定的基础。