目的:作为常见并高发癌症,如何做到早发现、早诊断、早治疗从而使胃癌患者的生存率得到提高是临床上亟需解决的问题之一。资料显示,目前临床上所用的肿瘤标志物通过联合检测手段基本可以达到筛查的目的,但是在实际应用中存在着明显的特异性和灵敏度低的问题,尤其是缺乏针对早期胃癌诊断的肿瘤标志物。本研究利用已获得的潜在的新早期胃癌标志物过氧化物酶-4（Prx4）为研究对象,在临床和细胞、分子不同水平上,深入论证其作为早期胃癌标志物的科学性。研究内容及方法:1.不同组织中Prx4表达量差异性研究（1）提取靶蛋白收集正常胃粘膜上皮组织、早期胃癌组织、进展期胃癌组标本,并利用胶原酶Ⅳ消化组织的方法分离出组织细胞。利用适配子、生物素链酶亲和素磁珠的方法分离提取得到靶蛋白,并通过SDS-PAGE实验对各时期组织表达量进行初步鉴定。（2）Prx4蛋白表达量的检测以细胞裂解液获得的组织总蛋白为样本,利用ELISA和western blot的方法,检测Prx4在正常胃粘膜上皮组织、早期胃癌组织、进展期胃癌组织中的表达量。（3）Prx4 mRNA表达量的检测利用RT-PCR法检测Prx4 mRNA表达量。用正常胃粘膜上皮组织、早期胃癌组织、进展期胃癌组织为样本,提取总RNA。设计PCR引物并进行PCR,通过琼脂糖凝胶电泳法检测Prx4 mRNA表达量。2.Prx4与胃细胞转化过程的相关性研究选正常胃黏膜细胞GES-1株,利用MNNG为诱变剂,根据细胞形态变化及划痕实验确定诱变剂的最佳用量。实验分两组:第一组诱变0、4、8、12、16、20、24h后更换不含诱变剂培养基后全部培养24h;第二组诱变16h后更换不含诱变剂培养基,分别培养0、4、8、12、16、20、24h。利用划痕实验、MTT实验、集落形成实验确定GES-1细胞株转化过程中细胞的形态变化、迁移、增殖能力和细胞接触抑制的改变。通过ELISA、western blot和RT-PCR的方法鉴定Prx4蛋白质和mRNA的表达量以确定Prx4与胃癌发生和发展的相关性。结果:1.不同组织中Prx4表达量差异性研究SDS-PAGE实验结果显示早期胃癌组织中用Ap7提取得到的蛋白都是条带单一,并且质量相同均在27KDa左右。早期胃癌组表达量（16.8±2.35ng/μl）显著高于进展期胃癌组表达量（8.4±2.96ng/μl）（P<0.01）;早期胃癌组表达量显著高于正常胃粘膜组织组表达量（4.5±2.36ng/μl）（P<0.01）;进展期胃癌组与正常胃粘膜组相比有显著性差异（P<0.01）。mRNA水平检测结果与蛋白分子水平的检测结果相一致。2.Prx4与胃细胞转化过程的相关性研究（1）根据细胞形态变化、细胞划痕实验结果确定诱变剂的最佳用量为8×10-5mol/l。（2）诱变不同时间,培养24h组结果:诱变16h后,细胞出现重叠堆积生长;细胞增殖率最高;细胞集落形成能力升高,细胞团的面积较大;16h之后的细胞迁移能力明显升高,因此诱变16h是细胞发生转化的时间点。（3）诱变不同时间,培养24h组结果:0-16h阶段Prx4表达量逐渐升高,诱变16h后表达量降低;诱变16h,培养不同时间组结果:细胞转化后,随着培养时间的增加,Prx4的表达量降低。（4）诱变不同时间,培养24h组Prx4 mRNA表达逐渐升高;诱变16h,培养不同时间组Prx4 mRNA表达没有明显变化。结论:临床实验结果提示Prx4可作为早期胃癌的生物标志物。细胞水平上Prx4仅在转化过程中高表达,因此Prx4主要参与细胞转化过程,且促进转化过程。细胞水平结果实验结果与临床实验相一致,证实Prx4可作为早期胃癌标志物。