微藻和蒜头果来源3-酮脂酰-CoA合酶基因克隆及耶鲁维亚酵母(Yarrowia lipolytica)产神经酸的初步研究

来源 :青岛科技大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:chen1155588
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神经酸(C24:1)是超长链单不饱和脂肪酸(very long chain monunsatuated fatty acid, VLCMFA)中常见且具有独特的工业用途和潜在药用保健功效的脂肪酸,现在的主要来源是动物,近年来,生物工程改造对于植物油的开发利用得到了发展,却仍存在着来源少、规模化生产较难等制约。本文是针对产油酵母耶鲁维亚酵母(Yarrowia lipolyticd)的产神经酸(nervonic acid)进行基因改造和培养优化。对外源基因微藻来源的3-酮脂酰-CoA合酶(3-ketoacyl-CoA synthase, KCS),拟南芥来源的FAE1基因、酵母来源的DGA1基因和EL02基因,利用Gibson Assembly方法,高效的进行了多基因表达质粒pMT-ZKCS、pMT-ZKCS-ELO2、pMT-DGA1-FAE1等的构建工作,并将酵母转化方法进行改进后进行成功转化。并通过对于筛选标记的选择和启动子的优化等方面,获得了有一定价值的突变株:在耶鲁维亚酵母的油脂占干酵母比重上从12%提高到了35%;调整了耶鲁维亚酵母的脂肪酸组成,使得超长链脂肪酸C24:0的含量得到提高。建立了一套完整有效的耶鲁维亚酵母的分子生物学研究机制,为后面的研究打下了坚实的基础。更为之后进行耶鲁维亚酵母产神经酸的产业化做了理论探索。另外通过对于蒜头果的研究和分析,利用高效touch-down PCR、短引物PCR和TAIL-PCR等特殊的分子技术,快速准确的克隆得到高神经酸含量的蒜头果的3-酮脂酰-CoA合酶基因,并对其进行了一定的分子学分析。
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