研究背景卵巢癌是女性群体中发病率和死亡率都比较高的疾病,腹腔播散和远处转移是其致死的重要原因,但其侵袭转移的机制尚不明确。我们研究团队前期发现STEAP1在卵巢癌中高表达并与癌细胞的侵袭转移有关,免疫共沉淀结果显示HSPA8能与STEAP1结合,且HSPA8是质谱鉴定中排名第一位的基因。HSPA8被证明能够参与肿瘤细胞的增殖分化。HSPA8在多种恶性肿瘤中呈高表达,但其在卵巢癌的作用尚不清楚。故本研究针对HSPA8在卵巢癌中的作用,分别从临床、组织、细胞和动物四个层面展开了一系列研究,旨在探索能够预防卵巢癌侵袭转移的基因靶点。研究目的1.探讨HSPA8与卵巢癌患者生存预后的关系;2.探讨HSPA8在正常卵巢组织、卵巢肿瘤组织和卵巢癌细胞中的表达情况;3.探讨HSPA8与卵巢癌细胞的转移、侵袭、增殖、克隆形成和成瘤能力的关系;4.探讨HSPA8对卵巢癌细胞EMT进程、cGAS-STING信号通路和自噬的影响。研究方法1.应用免疫共沉淀发现与鉴定HSPA8;2.通过Kaplan-Meier plotter公开数据库挖掘HSPA8与卵巢癌患者生存预后的关系;3.应用免疫组化法检测HSPA8在正常卵巢组织和卵巢肿瘤组织中的表达情况;4.应用RT-qPCR、免疫细胞化学法和Western blot检测HSPA8在不同卵巢癌细胞株中的表达差异;5.应用慢病毒转染来升高或降低卵巢癌细胞中HSPA8的表达,并用RT-qPCR、免疫荧光和Western blot对转染效果进行验证;6.应用Transwell小室、CCK8试验和平板克隆及建立裸鼠皮下成瘤模型检测HSPA8降表达或过表达前后卵巢癌细胞的转移、侵袭、增殖、克隆形成和成瘤能力;7.在透射电镜下观察HSPA8降表达或过表达后卵巢癌细胞形态的变化,应用RT-qPCR和Western blot检测HSPA8降表达或过表达后卵巢癌细胞EMT相关基因、cGAS-STING信号通路靶基因和自噬相关基因表达的改变。研究结果1.HSPA8 在 ES-2、SKOV-3和STEAP1过表达细胞株OVCAR-3EX中均能与STEAP1结合;2.HSPA8高表达的卵巢癌患者生存率低于低表达者;3.卵巢组织中HSPA8表达量为低分化卵巢肿瘤组织＞高分化卵巢肿瘤组织＞良性卵巢肿瘤组织＞正常卵巢组织;4.四种卵巢癌细胞中HSPA8表达量为ES-2＞SKOV-3＞CAOV-3＞OVCAR-3;5.慢病毒转染效率达到了 80%以上。实验获得了 HSPA8稳定低表达和高表达的细胞株;6.HSPA8降表达的卵巢癌细胞其转移、侵袭、增殖和克隆形成及裸鼠皮下成瘤能力均有所减弱,而HSPA8过表达的细胞中这些能力均有所增强;7.HSPA8降表达的卵巢癌细胞中EMT促进基因（ZEB1、N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Slug和Snail）表达量降低,EMT抑制基因E-cadherin表达量升高,而HSPA8过表达的细胞中与之相反;8.HSPA8降表达的卵巢癌细胞中cGAS-STING信号通路靶基因表达量降低,而HSPA8过表达的细胞中与之相反;9.HSPA8降表达的卵巢癌细胞中自噬相关基因p62、LC3、ATG5、ATG7及WIPI2表达量升高,自噬小体增多,而HSPA8过表达的细胞中与之相反。Beclin1、ULK1、P-ULK1表达量在HSPA8降表达或过表达前后的细胞中无明显变化。研究结论1.HSPA8在卵巢癌中高表达,且其高表达的卵巢癌患者预后不良;2.HSPA8增强卵巢癌细胞转移、侵袭、增殖、形成克隆和成瘤能力;3.HSPA8在卵巢癌细胞中促进EMT进程,激活cGAS-STING信号通路并抑制自噬。