对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus，WSSV)是给全球对虾养殖业带来巨大经济损失的一种病毒，该病毒具有死亡率高，宿主范围广等特点，深入研究WSSV的致病性，对于有效控制WSSV感染具有重要意义。本研究主要内容和结果如下：第一部分：rVP90片段（以下简称VP90p）的原核表达及与WSSV结构蛋白和宿主细胞蛋白的作用。根据GenBank上WSSV vp90基因的序列，用Premier5.0软件设计合成引物。以WSSV DNA为模板，PCR扩增得到vp90含RGD模序758bp基因，将其重组至pBAD/gIIIA中，构建重组表达载体pBAD/gIIIA-vp90p并转入大肠杆菌Top10中。重组菌株Top10-pBAD/gIIIA-vp90p经鉴定正确后，L-阿拉伯糖在37℃诱导重组基因工程菌，表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测，显示有与预期35kDa大小相符合的目的蛋白，采用Co2+亲和层析的方法，获得纯化的目的蛋白。采用Far-western blot方法分析地高辛标记的rVP90p与WSSV的作用，得到作用蛋白条带经质谱鉴定为VP26和VP28。为了进一步验证实验的准确性，将标记的VP90p与体外原核表达的rVP26、rVP28C、rVP28N进行作用，结果表明，VP90p与VP26和VP28有作用。为研究VP90p是否可粘附于对虾血淋巴细胞，将FITC标记的VP90p与对虾血淋巴细胞作用，激光共聚焦观察，发现VP90p与血淋巴细胞有作用。第二部分：rVP39与WSSV及对虾鳃膜蛋白的作用。在已有rVP39重组表达的基础上，采用Far-western blot方法分析地高辛标记的rVP39与WSSV的作用，得到显色条带经质谱鉴定为VP26，体外结合实验进一步证明rVP39与VP26的作用。此外通过标记的rVP39与凡纳滨对虾鳃膜蛋白的作用，筛选出与一个与rVP39具有作用的鳃膜蛋白，经质谱分析鉴定该宿主蛋白为F0-ATP synthase b链的部分序列。第三部分：F0-ATP synthase b链（简称F0）的表达以及功能验证。根据F0-ATP synthase b链的部分序列设计引物，扩增得到230bp基因，构建重组表达载体pBAD/gIIIA-F0并转化至大肠杆菌Top10中。重组菌株经鉴定正确后，L-阿拉伯糖诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测，显示有与预期大小14kDa相符合的目的蛋白，采用Co2+亲和层析的方法，获得纯化的目的蛋白，制备兔抗。Far-western blot实验表明，F0与rVP26、rVP28C、rVP28N、rVP39有作用，间接免疫荧光实验表明，VP26、VP28、VP39与F0共定位于感染对虾血淋巴细胞上。重组F0对WSSV感染的相对保护率为17.94%。组织分布实验分析表明，F0广泛分布于对虾肌肉、肝胰腺、肠、血淋巴、类淋巴、鳃组织中。细胞定位实验表明，F0分布于血淋巴细胞质膜。Real-time PCR分析表明，在WSSV感染12h时，F0在肠、鳃、肝胰腺和血淋巴的mRNA表达水平快速增加，达到最高。第四部分：对虾血淋巴细胞的原代培养及与VP37p的作用。对虾血淋巴细胞的原代培养及在原代细胞培养条件下观察重组表达的对虾白斑综合征病毒粘附蛋白VP37片段（VP37p）与对虾血淋巴细胞的作用。结果表明，中国对虾血淋巴细胞体外培养可存活12d，体外培养的对虾血淋巴细胞与量子点标记的VP37p有相互作用。