【摘 要】
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本文主要研究是粟酒裂殖酵母核糖体蛋白L32-1和L32-2的启动子及其转录调控因子,通过分子生物学和生物信息学的方法确定了启动子的范围,通过酵母单杂交的方法找到了一组启动子
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本文主要研究是粟酒裂殖酵母核糖体蛋白L32-1和L32-2的启动子及其转录调控因子,通过分子生物学和生物信息学的方法确定了启动子的范围,通过酵母单杂交的方法找到了一组启动子结合蛋白,该蛋白能分别与两个核糖体的启动子相互作用。本实验室之前的实验通过不同实验的研究证明了RPL32-1和RPL32-2在细胞内存在不同功能,RPL32-1、RPL32-2在细胞处于不同生长状态下表达水平不同;当细胞进入沉默状态时RPL32-1高表达抑制细胞分裂;而细胞处于对数期时RPL32-2高表达则促进细胞分裂。因此,RPL32的同源基因的功能差异,进一步证明了重复的核糖体蛋白的同源基因在细胞内都存在不同的功能。核糖体蛋白是细胞翻译机制的重要组成部分,核糖体蛋白基因的转录和翻译效率直接影响着细胞翻译机制的功能。本论文在前期研究的基础上,对启动子和调控因子进行初步探索。首先通过分子生物学和生物信息学的方法分析两个核糖体蛋白的启动子序列特征。RPL32-1的启动子在转录起始位点上游200bp,其中,120bp到200bp处存在增强子序列。RPL32-2的启动子在转录起始位点上游1000bp,其中,900bp到1000bp处存在增强子。利用酵母单杂交技术,确定了一组启动子结合蛋白RPLX,并确定RPLX1与RPL32-2的启动子能够相互作用,而RPLX1与RPLX2和RPL32-1的启动子都能有相互作用。在之前的实验中还并未发现该核糖体蛋白有启动子结合蛋白的作用,后续实验可以进一步探究该蛋白与启动子的结合位点和调节作用。
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