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目的:(1)构建hIL-24 原核表达载体pET-21a(+)-IL-24, 并在大肠杆菌中进行表达,将获得的rhIL-24 蛋白纯化复性,体外实验观察rhIL-24 蛋白对乳腺癌细胞(MDA-MB-231 细胞)生长抑制效应及诱导乳腺癌细胞凋亡的作用;(2) 构建hIL-24真核表达载体pcDNA3-hIL24,将其转染CHO 细胞并进行稳定表达,体外检测CHO细胞表达的rhIL-24 蛋白对乳腺癌细胞(MDA-MB-231 细胞)的抗肿瘤活性及诱导乳腺癌细胞凋亡的功能; (3)体外观察rhIL-24 蛋白免疫刺激及抑制血管形成的作用,进一步探讨rhIL-24 蛋白的的生物学功能;(4)采用原核表达rhIL-24 蛋白和pcDNA3-hIL-24 真核质粒对裸鼠乳腺癌动物模型进行治疗研究,观察和比较两者治疗效果,探讨其治疗作用机理。方法:(1)以pBV220-IL-24 载体(本室构建)为模板,以上游含有BamHI 酶切位点,下游含有XhoI 酶切位点的hIL-24 引物进行PCR 扩增,将pET-21a(+)质粒和PCR 产物双酶切后回收, T4DNA 连接酶连接,氯化钙法转化DH5α感受态细胞,PCR 鉴定重组子后测序。将测序正确的pET-21a(+)-IL-24 重组质粒抽提后转化BL21菌株,挑取阳性克隆。加入IPTG(终浓度为1mmol/L),37℃诱导表达,将所得包涵体进行洗涤,溶包,复性后透析,获得纯化rhIL-24 蛋白,Western-blot 方法对其进行鉴定;采用MTT 法观察rhIL-24 蛋白对MDA-MB-231 乳腺癌细胞的抑制效应;Hoechst33258 染色检测MDA-MB-231 细胞凋亡形态;FCM 检测MDA-MB-231 细胞的凋亡率。(2)用KpnⅠ和XbaⅠ双酶切pUC19-hIL-24 质粒DNA,将其定向克隆至经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切的pcDNA3 真核表达载体上,以氯化钙法将构建的pCDNA3-hIL-24 质粒转化DH5α感受态细胞,用PCR 方法和双酶切分析方法鉴定重组子。采用阳离子脂质体将pCDNA3-hIL-24 质粒转染CHO 细胞。培养、传代至G418选择性培养基挑选阳性转染细胞克隆。RT-PCR 及Western bolt 检测目的基因在CHO细胞中的表达;采用MTT 法观察50%稳定转染pCDNA3-hIL-24 质粒的CHO 细胞上清的培养液对MDA-MB-231 乳腺癌细胞的抑制效应; TUNEL 染色检测