【摘 要】
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目的肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤,在世界癌症相关死亡中位居第三位。HCC早期临床表现不典型,多数患者确诊HCC时已处于疾病中、晚期。肝癌根治性切除是目前治疗HCC的主要手段之一,然而术后肿瘤的复发、转移仍是HCC患者总体预后欠佳的重要原因。因此,寻找并探索HCC侵袭和转移的关键分子及其机制,将为改善HCC患者预后提供新思路。本文拟研
【基金项目】
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基于CRISPR/Cas9技术对肝内胆管细胞癌侵袭转移过程中关键泛素化相关酶的筛选及其作用机制研究国家自然科学基金资助,（编号:81871909）；
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目的肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤,在世界癌症相关死亡中位居第三位。HCC早期临床表现不典型,多数患者确诊HCC时已处于疾病中、晚期。肝癌根治性切除是目前治疗HCC的主要手段之一,然而术后肿瘤的复发、转移仍是HCC患者总体预后欠佳的重要原因。因此,寻找并探索HCC侵袭和转移的关键分子及其机制,将为改善HCC患者预后提供新思路。本文拟研究miR-122-5p对HCC增殖、侵袭和转移的影响,并初步探讨其分子机制。方法本研究结合我中心miRNA测序结果及TCGA数据库相关数据分析的结果,确定miR-122-5p为研究对象。通过qRT-PCR检测47例HCC患者肿瘤组织和癌旁组织中miR-122-5p的表达水平,并分析miR-122-5p表达水平与HCC患者临床病理特征、预后之间的关系。然后,上调HCC细胞中miR-122-5p的表达水平,评估miR-122-5p对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。再通过公开的miRNA靶基因预测网站,预测miR-122-5p作用的靶基因,荧光素酶报告实验验证选定的靶基因TRIM44与miR-122-5p是否可以直接相互作用。最后,通过细胞转染改变HCC细胞中miR-122-5p表达水平,检测TRIM44的mRNA水平和蛋白表达水平是否随之变化,并设计挽救实验评估TRIM44与miR-122-5p相互作用在HCC细胞增殖、迁移和侵袭中的影响。结果对TCGA数据库中420个样本的miRNA资料进行分析,结果表明miR-122-5p在HCC肿瘤组织中低表达,且其表达水平与HCC患者的OS和DFS均显著相关。结合我中心47对临床样本的qRT-PCR结果表明,miR-122-5p在HCC肿瘤组织中的表达水平显著低于配对的癌旁组织,且miR-122-5p的表达水平与肿瘤大小、AFP水平和淋巴结转移相关（P<0.05）。细胞功能实验表明,上调miR-122-5p后,HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均受到显著抑制。包括TRIM44在内,一共有142个基因被预测为miR-122-5p的靶基因,荧光素酶报告实验则证明了该预测的真实性。此外,在HCC细胞中过表达miR-122-5p,TRIM44mRNA水平和蛋白表达水平均表现出与miR-122-5p水平相反的变化趋势。随后成功用miR-122-5p mimics和TRIM44过表达质粒共转染HCC细胞,并通过挽救实验,证明了 miR-122-5p上调对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用可被表达水平恢复的TRIM44逆转。因此我们确定,miR-122-5p通过靶向TRIM44调控HCC的增殖、侵袭和转移。结论miR-122-5p在HCC中低表达,并与HCC患者的肿瘤大小、AFP水平、淋巴结转移及不良预后相关,上调miR-122-5p可显著抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。TRIM44是miR-122-5p的靶基因,受miR-122-5p调控,miR-122-5p上调可以通过靶向作用于TRIM44,抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。
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