动物可食性组织和禽蛋中杆菌肽残留的HPLC-MS/MS检测方法研究

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杆菌肽是由地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌的一些菌株合成的多肽类抗生素,对革兰氏阳性菌抗菌活性强大,胃肠道给药几乎不吸收,且具有良好的安全性。兽医临床常用的杆菌肽制剂为杆菌肽与金属离子如Zn2+或亚甲基水杨酸等离子形成的络合物。杆菌肽的应用涉及多个领域,既可作为外用制剂用于医学临床上,也可用作畜禽饲料添加剂和生物学的研究工具等。在农业生产生活中,杆菌肽制剂多用作动物促生长剂添加于饲料中,以刺激畜禽生长、提高增重效率和饲料转化率;兽医临床上还用于防治动物的坏死性肠炎。杆菌肽作为促生长的饲料添加剂在我国已被禁用。目前报道的动物可食性组织中杆菌肽残留量的检测方法有微生物法、免疫法和色谱法等,但现有的这些检测方法涉及的动物可食性组织不全。本研究旨在建立动物可食性组织和禽蛋中杆菌肽残留的HPLC-MS/MS检测方法,为动物可食性组织(肌肉、肝脏、肾脏、脂肪)和禽蛋中的杆菌肽残留监控提供技术支撑,这对保障动物源性食品安全、促进我国动物食品进出口贸易、维护消费者健康具有重要的实际意义。本试验建立了动物可食性组织和禽蛋中杆菌肽残留的HPLC-MS/MS检测方法。猪、鸡、鸭的可食性组织(肌肉、肝脏、肾脏和脂肪)和禽蛋样品中杆菌肽残留使用0.1%甲酸水溶液提取后,先后采用三氯乙酸乙腈沉淀除蛋白,正己烷除脂,混合阳离子型SPE小柱净化后,进HPLC-MS/MS检测。待测物使用C18色谱柱进行分离,以0.1%甲酸水溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱(乙腈:0~0.5 min 15%,5.0~5.5 min 85%,5.6~6.5 min 15%);质谱采用电喷雾电离(ESI),正离子扫描,多反应监测模式(MRM)进行检测,外标法定量。结果表明杆菌肽在50~1000 ng/g添加范围内,各组织中添加浓度与目标峰面积的线性关系良好,相关系数均大于0.999,本方法的LOD为30 ng/g,LOQ为50ng/g。猪、鸡、鸭的可食性组织及禽蛋在50、100、500、750ng/g的添加浓度下,平均回收率分别为71.3%~80.1%、71.6%~80.7%、71.5%~84.7%和66.2%~80.9%,批内变异系数分别为 0.8%~9.9%、1.3%~6.4%、1.1%~8.9%和2.6%~12.6%,批间变异系数分别为2.9%~7.2%、1.9%~4.8%、1.5%~6.8%和5.2%~9.5%。本试验建立的杆菌肽残留HPLC-MS/MS检测方法适用于猪、鸡和鸭的可食性组织及禽蛋中杆菌肽残留量的测定。
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