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菊花(Chrysanthemum morifolium)原产我国,为菊科菊属栽培种,是我国十大传统名花和世界四大切花之一,也是重要的盆栽和园林地被植物,具有很高的观赏和经济价值。我国是菊花的起源中心和菊属种质资源的分布中心,虽然其种质资源极其丰富,栽培品种繁多,花色、花型丰富,但菊花缺少蓝色、蓝紫色类新颖花色品种。因此,利用基因工程技术对菊花进行蓝色花色新品种培育,对丰富菊花花色极有重要意义。蓝色花色转基因除受体品种须具备催化F35H基因产物合成飞燕草素及其衍生物的能力外,高频再生体系和遗传转化体系的建立则是进行蓝色菊花转基因育种的前提条件之一。二氢杨梅素(DHM)饲喂实验表明‘南农绯玉’‘QX-144’、‘南农粉羽’和‘南农宫粉’可合成较多的飞燕草素(吴慧莹,2015)。为此,本研究旨在建立上述品种的高频再生体系,进而建立相应的遗传转化体系。并利用农杆菌介导法对已建立再生体系的蓝色转基因受体品种‘南农粉翠’进行VtF35H的转化。主要研究结果如下: 1.以‘南农绯玉’、‘QX-144’、‘南农粉羽’和‘南农宫粉’为材料,利用不同分化培养基,研究了不同激素浓度配比对菊花不定芽发生的影响。优化了菊花的再生条件,建立了菊花‘南农粉羽’叶片的高效再生体系。结果表明‘南农粉羽’叶片最适分化培养基为MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA1.0 mg· L-1,再生率为100.00%,繁殖系数为8.6。叶盘再生的潮霉素筛选浓度为10 mg·L-1;生根筛选潮霉素浓度为8 mg· L-1。 2.以再生率高的切花菊‘南农粉翠’为材料,预培养3d,农杆菌的浓度OD600值为0.5,侵染10min,25℃共培养3d,延迟培养7d,对‘南农粉翠’进行VtF35H基因的遗传转化。共获得40株潮霉素抗性苗,以潮霉素引物对其进行PCR鉴定,共鉴定出10个阳性株系。对10个阳性株系进行RT-PCR检测,2个株系中检测到VtF35H基因的表达,初步确定目的基因已经整合到菊花基因组中,并进行了表达。