【摘 要】
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肺炎克雷伯菌（Klebsiella Pneumoniae,KP）是严重的多重耐药（multidrug-resistant,MDR）细菌之一,常常引起细菌性肺炎、奶牛乳腺炎等。生物被膜（Bacterial biofilm,BF）是KP产生耐药性的重要机制,是细菌为适应不良环境而产生的由细菌和细胞外聚合物（extracellular polymeric substance,EPS）共同组成具有高度耐受
【基金项目】
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2021 年陕西省省级农业专项资金项目-畜牧专项资金（编号:XN022）
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肺炎克雷伯菌（Klebsiella Pneumoniae,KP）是严重的多重耐药（multidrug-resistant,MDR）细菌之一,常常引起细菌性肺炎、奶牛乳腺炎等。生物被膜（Bacterial biofilm,BF）是KP产生耐药性的重要机制,是细菌为适应不良环境而产生的由细菌和细胞外聚合物（extracellular polymeric substance,EPS）共同组成具有高度耐受性的复杂微生物群落,可附着在生物或非生物表面造成持续和慢性感染。双黄连（shuanghuanglian,SHL）是一种传统的中草药方剂,常被用于治疗呼吸道疾病。生产双黄连口服液制剂常常对挥发油部分没有回收利用,本研究探讨了含挥发油双黄连口服液和不含挥发油双黄连口服液及回收的纯双黄连挥发油对多重耐药肺炎克雷伯菌（multidrug-resistant Klebsiella Pneumoniae,MDR KP）的抑菌效果以及对BF形成相关基因转录水平的影响,为双黄连制剂治疗动物呼吸道疾病的临床应用提供依据。本研究分别测定含挥发油双黄连口服液、不含挥发油双黄连口服液和纯双黄连挥发油单用及其与抗生素联用对MDR KP的抑菌效果;通过结晶紫染色法测定MDR KP的BF形成能力以及三种双黄连制剂对MDR KP的BF形成的抑制效果;PCR检测MDR KP的BF形成相关基因分布;RT-PCR测定三种双黄连制剂对MDR KP的BF形成相关基因转录水平的影响。主要结果如下:1.不含挥发油的双黄连口服液对KP1和KP2的MIC均为375 mg/m L,含挥发油的双黄连口服液抑菌效果较不含挥发油的双黄连口服液高出4倍,为93.75 mg/m L,而纯双黄连挥发油的抑菌效果最好,为0.05 mg/m L;将其分别与克林霉素、苯唑西林、强力霉素、阿米卡星、美罗培南和环丙沙星联合使用后,双黄连挥发油分别与环丙沙星和克林霉素的组合表现为协同作用,双黄连挥发油分别与美罗培南和苯唑西林组合、含挥发油的双黄连口服液分别与强力霉素、克林霉素和苯唑西林组合、不含挥发油的双黄连口服液与美罗培南组合均表现为相加作用,可有效降低抗菌药物使用浓度。2.MDR KP菌株具有极强的BF形成能力（P＜0.01）;1/8 MIC、1/4 MIC、1/2 MIC和MIC的三种双黄连制剂对BF形成均具有极显著抑制作用（P＜0.01）,且具有浓度依赖性,1/16 MIC浓度时,只有纯双黄连挥发油对KP1菌株BF的形成具有极显著抑制作用（P＜0.01）;三种双黄连制剂均可显著降低mrk D基因转录水平（P＜0.05）,而只有含挥发油的双黄连口服液和纯双黄连挥发油可极显著降低wbbm和wzm基因转录水平（P＜0.01）。以上结果表明,三种双黄连制剂与抗生素联用可协同或相加抑制多重耐药肺炎克雷伯菌;三种双黄连制剂均可极显著抑制多重耐药肺炎克雷伯菌生物被膜的形成（P＜0.01）,并具有剂量依赖性;三种双黄连制剂均可显著降低mrk D基因转录水平（P＜0.05）,含挥发油的双黄连口服液和纯双黄连挥发油可极显著降低wbbm和wzm基因转录水平（P＜0.01）。
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