【摘 要】
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背景:软骨肉瘤是一种严重威胁生命的骨恶性肿瘤。对化疗药物缺乏敏感性及术后高复发率是目前人软骨肉瘤治疗的瓶颈。药物再定位,是一种安全、经济、低成本的探索新型化疗药物的方法。氯硝柳胺作为一种治疗绦虫感染的抗寄生虫药物,已被证实具有潜在的抗肿瘤能力。但氯硝柳胺治疗人软骨肉瘤的研究鲜有报道,且氯硝柳在人软骨肉瘤中的作用及其机制尚不明晰。目的:探究氯硝柳胺在人软骨肉瘤中的作用及相关机制。方法:将不同浓度的氯
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背景:软骨肉瘤是一种严重威胁生命的骨恶性肿瘤。对化疗药物缺乏敏感性及术后高复发率是目前人软骨肉瘤治疗的瓶颈。药物再定位,是一种安全、经济、低成本的探索新型化疗药物的方法。氯硝柳胺作为一种治疗绦虫感染的抗寄生虫药物,已被证实具有潜在的抗肿瘤能力。但氯硝柳胺治疗人软骨肉瘤的研究鲜有报道,且氯硝柳在人软骨肉瘤中的作用及其机制尚不明晰。目的:探究氯硝柳胺在人软骨肉瘤中的作用及相关机制。方法:将不同浓度的氯硝柳胺作用于两种人来源软骨肉瘤细胞系SW1353及CAL78。第一部分:通过细胞增殖及细胞毒性实验（CCK-8）、结晶紫染色细胞活力检测实验及细胞克隆形成实验检测氯硝柳胺对软骨肉瘤细胞活性、增殖能力的影响。第二部分:通过细胞划痕愈合实验及细胞侵袭实验检测氯硝柳胺对人软骨肉瘤细胞的迁移及侵袭能力的影响。第三部分:通过Annexin V-FITC流式检测及TUNEL凋亡实验检测氯硝柳胺对人软骨肉瘤细胞凋亡的作用。第四部分:为研究氯硝柳胺对人软骨肉瘤细胞线粒体的影响及氯硝柳胺诱导人软骨肉瘤细胞凋亡的机制,通过JC-1线粒体膜电位实验及Seahorse细胞线粒体压力测试检测氯硝柳胺对细胞线粒体膜电位、细胞耗氧率的影响。通过蛋白免疫印迹检测caspase-3、活化caspase-3、caspase-9,活化caspase-9及β-tubulin蛋白表达,从蛋白水平探究氯硝柳胺对人软骨肉瘤细胞凋亡的作用机制。结果:第一部分:氯硝柳胺可以显著抑制人软骨肉瘤细胞的活性及增值能力,对SW1353及CAL78细胞的抑制作用分别在0.5-2μM及1-4μM最为显著,氯硝柳胺作用于SW1353及CAL78细胞的药物IC50值分别为0.5072及0.9472μM。第二部分:氯硝柳胺可以减弱软骨肉瘤细胞的细胞迁移及侵袭能力。第三部分:氯硝柳胺可诱导人软骨肉瘤细胞系SW1353及CAL78的细胞凋亡,并主要影响了SW1353细胞的晚期凋亡和CAL78的早期及晚期凋亡第四部分:氯硝柳胺可以破坏细胞的线粒体膜电位,降低两种软骨肉瘤细胞的线粒体膜电位,抑制线粒体ATP生成、最大呼吸能力及呼吸储备能力。氯硝柳胺作用于人软骨肉瘤细胞后,通过蛋白印迹检测出细胞的活化caspase-3及活化caspase-9蛋白表达增加,表明氯硝柳胺诱导的人软骨肉瘤细胞凋亡主要通过caspase依赖性的线粒体凋亡途径实现。结论:氯硝柳胺呈现出一定的抗软骨肉瘤作用,并通过诱导激活caspase依赖性线粒体凋亡途径促进软骨肉瘤细胞系的细胞凋亡。
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