论文部分内容阅读
在植物的各部位的组织中,存在着种类丰富的内生菌,这些内生菌对于植物的生长发育起着有益作用。本文以粉单竹(Bambusa Chungii)为研究对象,对其各组织的内生细菌进行分离纯化,并将得到的内生细菌进行分子鉴定及聚类分析。对于各内生菌代表菌株进行各项生理生化鉴定及生物学功能分析,旨在研究粉单竹内生细菌的遗传多样性和功能多样性。通过稀释涂布法,利用不同培养基分离内生菌,并通过连续划线法得到纯化菌株并保存。通过IS-PCR插入序列指纹图谱方法对各内生菌进行聚类分析。通过对内生菌16S r RNA基因序列的测定对内生细菌进行分子鉴定及系统发育分析。对已鉴定的各类群代表菌株进行固氮、解钾、溶磷、产蛋白酶、产铁载体、分泌生长素、产纤维素酶和拮抗植物病原菌等多种生物学功能的测定。(1)从粉单竹(Bambusa Chungii)中分离纯化获得46株内生细菌,采用IS-PCR插入序列指纹图谱的方法将它们聚为13个类群,16S r RNA基因分子水平的鉴定结果显示13个类群的代表菌株为9个属的13个物种,表明粉单竹内生细菌具有物种多样性,13个类群中芽孢杆菌属的菌株有4类,为优势种群。(2)粉单竹内分离纯化出的内生细菌具有多种生物学功能:13类代表菌株中,6个菌株具有产铁载体功能;6个菌株有解钾功能,其中代表菌株S511(Burkholderia cepacia)解钾能力最强,其发酵液中可溶性钾含量为112.94 mg/L;9个菌株具有溶磷功能,其中代表菌株S511(Burkholderia cepacia)溶磷能力最强,其发酵液中可溶性磷为82.53 mg/L;5个菌株具有固氮酶活性,代表菌株S531(Raoultella ornithinolytica)固氮酶活性最高,为362.59(nmol C2H4/(m L·h));12个菌株可以分泌生长素,代表菌株S531(Raoultella ornithinolytica)产生长素含量为31.26 mg/L;6个菌株有产蛋白酶的活性,其中代表菌株S041(Bacillus altitudinis)产蛋白酶能力最强,其蛋白酶透明圈与菌落直径比为3.249;6个菌株可产纤维素酶,其中代表菌株S052(Pantoea ananatis)产纤维素酶能力最强,其纤维素降解透明圈与菌落比值为7.250。(3)获得3株对病原菌Fusarium oxysporum和Alternaria tenuissima具有较好拮抗效果的生防菌株S031(Bacillus siamensis),S041(Bacillus altitudinis)和S061(Bacillus amyloliquefaciens);通过PCR扩增到生防菌株中的四个抗病相关的基因Itu A、Itu B、Itu C和Itu D。