【背景】帕金森病(Parkinson’s diease,PD)是一种常见的慢性进行性神经退行性变性疾病,其主要的临床表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓以及平衡障碍等运动症状,同时还有精神障碍、认知障碍、自主神经功能障碍等非运动症状。PD病因及发病机制至今仍未彻底明确,因而仍然没有一种有效的方法能防治这类疾病。目前研究已经表明丰富环境(enriched environment,EE)可以通过影响神经可塑性,在脑损伤后起到康复治疗作用,但其作用机制尚不明确。现已发现miR-133b能在中脑多巴胺能神经元中特异性表达,并发现miR-133b在中脑多巴胺能神经元的成熟、功能和存活上起着重要的作用。本实验通过构建PD大鼠模型,在丰富环境干预后研究miR-133b的表达水平,探讨丰富环境对PD治疗的可能机制。第一部分丰富环境干预对帕金森大鼠行为学及多巴胺能神经元表达的影响【目的】探讨丰富环境干预对帕金森大鼠行为学改变、多巴胺能神经元的表达的影响,以期阐明EE治疗PD的可能机制。【方法】6-羟基多巴胺(6-OHDA)单侧毁损纹状体制作PD大鼠模型,造模成功大鼠随机分成2组(每组6只):PD模型大鼠+丰富环境干预组(PD+EE组),PD模型大鼠+标准环境干预组(PD+SE组)。另设两组(每组6只)为假手术大鼠+丰富环境干预组(sham+EE组)、假手术大鼠+标准环境干预组(sham+SE组)。每组分别给予丰富环境、标准环境干预6周,干预结束后进行大鼠平衡木试验观察大鼠失足比例,评估大鼠行为学改变,随后行大鼠脑组织免疫组化比较TH免疫阳性细胞数目和TH免疫阳性纤维灰度值,从而观察多巴胺能神经元表达情况。【结果】1、标准环境干预下,PD模型大鼠失足比例为2.40%±0.150%,假手术组为0.00%±0.000%,两者比较,差异有统计学意义(Z=-3.614,p<0.01),前者多于后者。丰富环境干预6周的PD大鼠失足比例为0.19%±0.064%,与标准环境干预6周的大鼠比较,差异有统计学意义(Z=-2.763,p<0.05),前者少于后者。2、标准环境干预下,PD模型大鼠损毁侧纹状体TH免疫阳性纤维灰度值为1.0091±0.4857,假手术组为2.8373±0.4674,两者比较,差异具有统计学意义(Z=-2.882,p<0.01),前者低于后者;PD模型大鼠损毁侧黑质TH免疫阳性细胞数目为123.17±25.89,假手术组为346.67±15.95,两者比较,差异有统计学意义(Z=-2.882,p<0.01),前者少于后者。PD模型大鼠中,丰富环境干预6周损毁侧纹状体TH免疫阳性纤维灰度值为1.6711±0.4803,与标准环境干预6周比较,差异有统计学意义(Z=-2.082,p<0.05),前者高于后者;丰富环境干预6周损毁侧黑质TH免疫阳性细胞数目为184.17±24.31,与标准环境干预6周比较,差异有统计学意义(Z=-2.722,p<0.01),前者多于后者。假手术组大鼠中,丰富环境干预6周损毁侧纹状体TH免疫阳性纤维灰度值为3.7785±0.2122,与标准环境干预6周比较,差异有统计学意义(Z=-2.882,p<0.01),前者高于后者;丰富环境干预6周损毁侧纹黑质TH免疫阳性细胞数目为459.50±37.09,与标准环境干预6周比较,差异有统计学意义(Z=-2.887,p<0.01),前者多于后者。【结论】丰富环境干预可增加PD大鼠黑质-纹状体系统多巴胺能神经元数目,改善PD模型大鼠行为学。第二部分丰富环境干预对帕金森大鼠中脑miR-133b表达的影响【目的】观察丰富环境干预对PD大鼠中脑miR-133b表达的影响,探讨其治疗PD的可能机制。【方法】6-OHDA单侧毁损纹状体制作PD大鼠模型,造模成功大鼠随机分成2组(每组6只):PD+丰富环境干预组(P1组),PD+标准环境干预组(P2组)。另设两组(每组6只)为假手术+丰富环境干预组(S1组)、假手术+标准环境干预组(S2组)。每组分别给予不同环境干预6周,干预结束后取大鼠中脑提取总RNA,逆转录为c DNA后进行荧光定量PCR,测定miR-133b的相对表达水平。【结果】标准环境中,PD模型大鼠中脑miR-133相对表达量为1.6833±0.0367,假手术组为0.6883±0.0650,两者比较,差异具有统计学意义(t=23.093,p<0.01),前者高于后者;丰富环境干预的PD模型大鼠中脑miR-133的相对表达量为0.6058±0.0792,标准环境干预的PD模型大鼠为0.9567±0.0116,两者比较,差异具有统计学意义(t=7.442,p<0.01),前者低于后者。【结论】6-OHDA可能通过上调miR-133b从而导致神经元退行性变。丰富环境可能通过抑制miR-133b的表达,促进黑质-纹状体系统多巴胺能神经元的修复,从而实现PD的治疗作用。