新孢子虫是一种隶属于顶复亚门的原生动物寄生虫,严重危害动物健康及全球奶牛养殖业的经济发展。近年来,有关新孢子虫病的防治方法逐渐成为兽医领域研究的热门课题。中药提取物作为新药开发的主要来源之一,是抗新孢子虫药物研发的重点研究对象。本研究选取具有抗癌、抗寄生虫作用的中药提取物进行体外抗新孢子虫活性筛选,并在体内外对筛选出的中药提取物进行抗新孢子虫作用初步研究,为新孢子虫药物研发及其用于临床治疗提供理论基础。本研究通过MTT法测定中药提取物柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、槲皮素、黄芩苷及氢溴酸槟榔碱对RAW264.7细胞的细胞毒性,确定各中药提取物的安全给药剂量。首先建立新孢子虫感染RAW264.7细胞体外模型,Giemsa染色法筛选出抗虫效果最佳的中药提取物,对其抗虫效果进行进一步研究。将试验细胞分为空白组、模型组、给药组、阳性组,实时荧光定量PCR法测定各组细胞虫体荷载量。ELISA法测定细胞上清液中炎性细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-y）的含量。将纯化后的新孢子虫分为DMSO组、高剂量组、阳性组,透射电镜观察氢溴酸槟榔碱对新孢子虫超微结构的影响。体内试验中,首先建立新孢子虫感染小鼠体内模型,分组给药后测定各组小鼠存活率、平均存活时间及脏器指数;ELISA法测定小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量。MTT结果显示,5种中药提取物对RAW264.7细胞生存的最小抑制浓度:柴胡皂苷A为5 μg/mL、柴胡皂苷D为2.5 μg/mL、槲皮素为30 μg/mL、黄芩苷为100μg/mL、氢溴酸槟榔碱为100 μg/mL。Giemsa染色结果显示,5种中药提取物中氢溴酸槟榔碱抗虫效果最佳,在镜下几乎未发现虫体。实时荧光定量PCR结果显示,氢溴酸槟榔碱中剂量组细胞中虫荷量显著降低（P<0.05）,高剂量细胞中虫荷量极显著降低（P<0.01）,低剂量组细胞中虫荷量降低但无统计学意义（P>0.05）。ELISA结果显示,氢溴酸槟榔碱高剂量组细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量均极显著降低（P<0.01）,中剂量组细胞上清液中IL-1β的含量显著降低（P<0.05）,IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量极显著降低（P<0.01）,低剂量组细胞上清液中IL-1β、TNF-α的含量显著降低（P<0.05）,IL-6、IFN-γ的含量极显著降低（P<0.01）。透射电镜结果显示,氢溴酸槟榔碱可显著损伤新孢子虫超微结构。体内试验中,氢溴酸槟榔碱高剂量组小鼠的存活率明显上升,平均生存时间显著增长（P<0.05）;氢溴酸槟榔碱高剂量组小鼠心、肝指数极显著降低（P<0.01）、脾指数显著降低（P<0.05）,氢溴酸槟榔碱中剂量组小鼠心、肝指数显著降低（P<0.05）。ELISA结果显示,氢溴酸槟榔碱高剂量组小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量均极显著降低（P<0.01）,中剂量组小鼠血清中IL-1β的含量显著降低（P<0.05）,IL-6、TNF-α、IFN-γ的含量极显著降低（P<0.01）,低剂量组小鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量显著降低（P<0.05）,IL-1β、IL-6的含量降低但无显著性差异。综上所述,氢溴酸槟榔碱在体内外均具有良好的抗新孢子虫作用。氢溴酸槟榔碱通过抑制新孢子虫的增殖,减轻虫体对小鼠主要脏器的损伤,减轻新孢子虫感染引起的炎症反应,增强新孢子虫感染小鼠的免疫功能,提高小鼠存活率,可以作为抗新孢子虫的候选药物,为后续抗新孢子虫药物研发奠定理论基础,提供科学依据。