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目的:本研究分为临床回顾研究和实验研究两部分,临床研究中对广州中医药大学第一附属医院二内科2009年1月至2011年12月3年临床诊断为肝硬化的102例患者的性别、年龄、病因、症候、临床症状、证型及治疗用药规律等进行分析与总结,探讨“健脾”、“活血”在肝硬化的诊治过程中所占的地位和意义;实验研究通过观察健脾活血方联合MSCs移植对肝硬化大鼠血清ALT、AST、ALB、TB,肝组织中羟脯氨酸、SDF-1及CXCR4含量的变化,以及各组肝脏组织的HE染色、Masson染色、经绿色荧光蛋白标记的MSCs在肝脏中的分布情况,探讨健脾活血方联合MSCs移植治疗肝硬化大鼠中MSCs在肝脏内的定植、对肝功能的影响及改善肝硬化程度的机制,为临床用药提供有力的实验依据。方法:1.临床回顾研究:全部病例来源于广州中医药大学第一附属医院二内科。在海泰系统及嘉禾住院病例系统内调阅相关病例,将符合诊断标准的病例纳入本研究共102例。2.动物实验:将49只SPF级SD雌性大鼠分为空白对照(正常)组(7只,A组)和模型组(42只)两组,模型组大鼠采用40%CC14橄榄油溶液(CC14:橄榄油为4:6)皮下注射12周制成肝硬化大鼠的模型,将模型组再次分为4组(B组-模型组、C组-MSCs组、D组-健脾活血方组、E组-健脾活血方+MSCs),C组、E组大鼠经尾静脉注射MSCs,D组、E组大鼠用健脾活血方中药灌胃。结果:1.临床回顾性研究:通过回顾性研究,我们发现:肝硬化患者发病的年龄高峰为50-59岁之间,60-69岁次之,说明肝硬化的发病与年龄相关。男性肝硬化患者的比例高于女性。肝硬化的病因主要是慢性乙型肝炎病毒感染(占59.8%),酒精性肝硬化患者次之(占15.2%)。肝硬化的病位主要在肝脾,但是与肾、心、肺相关,症状表现主要是腹胀、疲倦乏力、纳差食少、水肿、尿少等症状,以湿热蕴结证为主,瘀血阻络证次之,用药多用白术、茯苓、猪苓、甘草、泽泻、茵陈、茜根、丹参、大腹皮、五爪龙、泽兰、太子参等,说明肝硬化的病理因素主要是湿热、瘀血、水湿,用药多选用具有补气健脾、活血化瘀、清热祛湿、利水渗湿的中药。因此我们在治疗肝硬化的过程中要注意“湿”“瘀”两个方面,用药时要以注意运用“健脾”及“活血”来遣方用药。2.实验研究结果表明:绿色荧光蛋白标记MSCs在C组、E组大鼠肝组织中都有定植。E组大鼠的血清中ALT含量与A组相比无统计学意义(P>0.05),与B组相比显著下降(P<0.01),与C组相比下降(P<0.05);各组大鼠血清AST含量无统计学意义(P>0.05);E组大鼠的血清中ALB含量与A组相比仍有所降低(P<0.05),与B组相比升高(P<0.05),与C组相比无统计学意义(P>0.05);E组大鼠的血清中TB含量与其它组相比无统计学意义(P>0.05)。E组大鼠肝组织中羟脯氨酸含量与A组相比显著上升(P<0.01),与B组相比降低(P<0.05),与C组相比含量虽然下降,但是无统计学意义(P>0.05)。各组免疫组化SDF-1、CXCR4阳性表达细胞数比较时发现,E组的阳性表达率明显高于A组、B组、C组(P<0.01)。病理显示:E组大鼠的肝小叶结构较A组有所破坏,与B组比较肝小叶结构破坏有所减轻,纤维条索疏松变窄,肝细胞水肿好转,变性情况明显改善,且胶原纤维增生较少,纤维间隔不明显,未见假小叶形成,肝小叶结构相对比较完整,与C组比较无明显差异。结论:本研究对106例肝硬化病例进行了系统的临床回顾性研究,结果如下:1.肝硬化患者发病的年龄高峰为50-59岁之间,60-69岁次之。说明肝硬化的发病与年龄相关。2.男性肝硬化患者的比例高于女性患者。3.肝硬化的病因主要是慢性乙型肝炎病毒感染(占59.8%),酒精性肝硬化患者占15.2%,居于第二位,提示我国肝硬化患者主要是乙型肝炎病毒感染引起,但是酒精性肝硬化患者数量有上升趋势。4.肝硬化的病位主要在肝脾,但是与肾、心、肺相关,症状表现主要是腹胀、疲倦乏力、纳差食少、水肿、尿少等症状。5.证型以湿热蕴结证为主,瘀血阻络证次之,用药多用白术、茯苓、猪苓、甘草、泽泻、茵陈、茜根、丹参、大腹皮、五爪龙、泽兰、太子参等,说明肝硬化的病理因素主要是湿热、瘀血、水湿。用药多选用具有补气健脾、活血化瘀、清热祛湿、利水渗湿的中药。因此我们在治疗肝硬化的过程中一定要注意“湿”“瘀”两个方面,用药时要以注意运用“健脾”及“活血”来遣方用药。6.健脾活血方联合MSCs移植组的肝组织病理显示肝小叶结构破坏有所减轻,纤维条索疏松变窄;肝细胞水肿好转,变性情况明显改善,炎性细胞浸润减少。胶原纤维增生较少,纤维间隔不明显,中央静脉见少量胶原组织向肝窦区延伸,但未形成包绕,未见假小叶形成,肝小叶结构相对比较完整,联合治疗有改善硬化程度、减少胶原蛋白沉积的作用。7.健脾活血方联合MSCs移植治疗肝硬化能够降低肝硬化大鼠的ALT含量,并增加ALB含量的作用,说明联合治疗能够改善肝硬化大鼠的部分肝功能。8.健脾活血方联合MSCs移植组肝组织中各组大鼠肝组织免疫组化SDF-1、CXCR4阳性表达的细胞数显著高于模型组及MSC移植组,说明联合治疗可能通过增加肝组织中SDF-1含量,提高MSCs的“归巢”;激活SDF-1/CXCR4介导的信号转导通路,从而改善肝硬化大鼠的肝功能及减轻肝硬化程度。