P5CRs（吡咯啉—5—羧酸还原酶）是普遍存在于原核和真核生物中的一种重要看家蛋白，其主要的功能是催化脯氨酸生物合成的最后一步反应，将P5C（吡咯啉—5—羧酸）转化为脯氨酸，同时将NAD（P）H氧化为NAD（P）+。目前已报道了400多种该蛋白家族中的成员，其中三个蛋白的三维晶体结构已被解析。　　 在本实验中，我们提取了果蝇的总RNA，通过逆转录获得了cDNA，进而通过PCR获得了编码果蝇P5CR的基因片段；将此片段连接到pET-28a（+）载体上，在大肠杆菌（Escherichiacoli）中得到了高效表达并通过多种纯化方法得到了适合晶体生长的高纯度蛋白；通过EGS交联实验和凝胶过滤层析检测了P5CR在溶液中的聚合形式；应用分光光度法测定了果蝇P5CR的酶活参数；采用悬滴气相扩散法筛选了P5CR的结晶条件并进行了优化。　　 实验结果主要有：（1）获得了该蛋白的纯化方法。（2）果蝇P5CR在溶液中的基本存在形式是十聚体，在此基础上可形成更大的聚合形式。（3）果蝇P5CR参与抗癌药物硫代脯氨酸的代谢，在该逆向反应中最适pH为高碱性，该酶在45℃的半衰期约15分钟。（5）筛选得到了果蝇P5CR的初步结晶条件（0.2MAmmoniumphosphatedibasic，20％PEG3350pH8.0）。　　 本实验结果为进一步研究该酶的催化机理及最终解析出它的三维晶体结构奠定了基础，对于P5CRs蛋白家族中其他蛋白的结构及功能的研究具有一定的借鉴意义。另外，果蝇是一种重要的模式生物，便于通过定点突变及敲除等手段研究各基因及其编码的产物的功能，因此，我们计划在后续的实验中，敲除果蝇中编码该酶的基因，以研究缺失该酶对果蝇的生长发育造成的影响。　　 论文的创新性体现为：　　 （1）在E.coliBL21中成功表达了果蝇P5CR，并得到了高效纯化。　　 （2）获得了果蝇P5CR蛋白的基本酶活参数。　　 （3）果蝇P5CR蛋白在体内的基本存在形式是同源多聚体。　　 （4）获得了该蛋白质的初步结晶条件。