目的:　　 男男性接触者(men who have sex with men，MSM)已成为人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)感染的重要人群，并是HIV向普通人群传播的桥梁人群，因此MSM人群是我国今后要重点关注和防治的对象。我国MSM人群疾病进展普遍较快，急需在感染早期就开始抗病毒治疗;观察性试验显示早期治疗可能有短暂的免疫学益处，并可能降低HIV在人群中传播，因此考虑在该人群中进行早期抗病毒治疗，其效果如何还需要进一步评估。　　 高效抗逆转录病毒治疗(high active antiretroviral therapy，HAART)的广泛应用可降低大多数患者血浆病毒载量并可增加外周血CD4+T细胞计数，实现血浆病毒复制的控制和免疫重建。但是由于病毒储存库的存在，HAART并不能治愈HIV感染，治疗一旦中断病毒立即反弹，疾病继续进展，因此HIV感染者需要终身服用抗病毒药物。潜伏感染和持续病毒复制可能是HIV存在于病毒储存库的两种主要机制，两者均可能是HIV清除及治愈的巨大障碍，此外持续病毒复制的存在也可能会影响治疗效果，与高免疫活化、较差的免疫重建及耐药株的出现有关。　　 潜伏感染是公认的治疗后病毒储存库存在的重要机制，HIV以整合后潜伏和整合前潜伏两种形式存在于潜伏储存库中。研究报道早期治疗是影响储存库大小的因素，但研究中早期治疗人群最低CD4+T细胞计数较慢性治疗者高，而最低CD4+T细胞计数是影响储存库大小的重要因素，因此尚不清楚早期治疗是否是影响储存库大小的独立因素。此外，抗病毒治疗后是否存在持续病毒复制仍有争议，在早期治疗者和慢性治疗者中是否存在差异尚无报道。　　 我国MSM人群中接受早期抗病毒治疗的HIV感染者兼有快速进展者和早期治疗者两个方面的特性，其治疗效果如何，治疗后潜伏储存库大小及持续病毒复制情况仍不清楚。因此本研究通过对最低CD4+T细胞计数无显著差异的快速进展早期治疗人群和慢性期治疗人群潜伏感染储存库大小和病毒进化的分析，综合比较HIV快速进展治疗者与慢性期治疗者病毒学疗效，从而为我国MSM人群抗病毒治疗时机的选择提供理论指导。　　 方法:　　 1、研究对象　　 包括以下三组患者:(1) HIV-1快速进展早期治疗者3例。对高危MSM队列进行随访，发现HIV新发感染者，估计其感染时间，定期随访HIV新发感染者，选择一年内开始抗病毒治疗，并治疗至少一年的患者3例。(2) Western blot确认试验阳性超过2年，抗逆转录病毒治疗一年以上，病毒学治疗成功的HIV-1慢性感染者10例。(3)13例来自河南的HIV-1长期不进展者。EDTA抗凝收集全血标本，并分离血浆、PBMC（peripheral blood mononuclear cell）标本，分别保存于-80℃和液氮中。　　 2、CD4+T淋巴细胞测定　　 将20μl CD4/CD8/CD3 TRITEST试剂加入CD4+T细胞绝对计数管中，加入50μl抗凝血，室温避光15分钟，加入免洗溶血素450μl，室温避光15分钟，FACSMMLTISET软件检测并进行自动分析。　　 3、病毒载量测定　　 1200Iμl血浆标本采用Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1Test在COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1自动载量仪上以RT-PCR方法测定病毒载量。检测范围为40-10000000 copies/ml。　　 4、DNA提取　　 采用冻存的PBMC标本约5（×）106 cells，用QIAamp blood DNA mini kit按操作说明从PBMC标本中提取DNA，溶于60μl无酶水中，-80度冰箱保存备用。　　 5、实时定量检测总HIV DNA及整合HIV DNA　　 在已有的定量检测总的、整合的HIV DNA方法的基础上，将原来特异针对B亚型病毒检测的引物、探针进行重新设计，使其对各亚型HIV病毒通用性更强，并对引物、探针进行调整从而优化反应体系，提高了检测敏感度。用表达相应HIVDNA和代表细胞数的宿主基因CCR5序列的M13噬菌体作为实时定量的标准品构建标准曲线，进行绝对定量。　　 6、整合HIV DNA pol区分子克隆　　 扩增整合HIV DNA特异的pol基因约1300 bp，产物切胶纯化后插入克隆载体pMDTM18-T Simple Vector，转入化学感受态菌DH5a挑选阳性克隆扩大培养，然后提取质粒DNA，并将鉴定正确的质粒进行双脱氧终止法测序。　　 7、序列分析　　 用Sequencher软件对测序得到的pol区核苷酸序列进行拼接并检验错误。用Hypermut软件(http://www.hiv.lanl.gov)确定序列是否有G→A超突变，若存在后续分析时被排除在外。用ClustalW软件将样品序列进行比对，必要时用BioEdit软件进行手工编辑校正。用MEGA5软件构建Neighbor-joining系统树分析，树的稳定性采用Bootstrap分析。使用美国斯坦福大学HIV耐药数据库网站相应软件和拉莫斯数据库Highlighter软件分别对序列进行耐药性分析和氨基酸同义突变、非同义突变分析。　　 用MEGA5软件对每例患者进行pol基因多样性(diversity)和离散率(divergence)分析:①治疗前时间点标本平均pol基因diversity;②治疗后时间点标本平均pol基因diversity;③两时间点样本的net divergence，net divergence是校正完样本内多样性差异的净遗传距离。　　 8、统计学分析　　 统计学分析采用SPSS17.0软件进行，首先对数据进行正态性检验，对总体分布符合正态分布的资料两样本均数比较采用t检验，对不符合正态分布的资料采用Mann-Whitney非参数检验。　　 结果:　　 一、研究对象基本资料及治疗相关信息　　 3例早期治疗者为HIV感染一年内CD4+T细胞降低到小于350 cells/μl，达到治疗标准的快速进展者，与慢性期治疗者相比最低CD4+T细胞计数无显著差异。13名长期不进展者未经抗病毒治疗CD4+T细胞计数即可维持较高水平。早期治疗者和慢性期治疗者最初均采用两种核苷类药物和一种非核苷类药物组合的一线治疗方案。2例治疗成功者的早期治疗者未出现短暂可检测到的病毒血症即blip，另1例早期治疗者320918在治疗后因耐药出现导致病毒学失败，更换为二线治疗方案后达到了病毒学抑制水平。慢性期治疗者在治疗3-6个月后达到血浆病毒RNA检测不出的水平，但多数(8/10)检测了blip的存在。　　 二、早期治疗对储存库大小的影响　　 抗病毒治疗前，HIV快速进展者感染早期总HIV DNA的水平为较慢性感染者低(p=0.011)，而LTNP患者中总的HIV DNA水平有低于早期感染者的趋势(p=0.093)，显著低于慢性感染者(p=0.000)。对于整合HIV DNA，早期感染者与慢性期感染者比较差异未达到统计学意义，但有高于LTNP患者的趋势。　　 抗病毒治疗一年后，急性感染者总HIV DNA有降低但未达统计学意义，慢性感染者中总的HIV DNA水平有降低(p=0.041)，两组患者整合HIV DNA治疗前后无明显差异。早期治疗的快速进展者和慢性期治疗者抗病毒治疗后均可检测到病毒潜伏储存库存在，但早期治疗者总的HIV DNA水平较慢性感染者水平明显低(p=0.011)，在整合HIV DNA方面，早期治疗者有较慢性治疗者低的趋势，但差异未达统计学显著水平(p=0.176)。　　 三、储存库中病毒多样性分析　　 7名患者基线和治疗后两个时间点共269条pol区克隆序列多样性分析结果显示3例早期治疗者基线病毒多样性较4例慢性期治疗者有较小的趋势(p=0.077)，抗病毒治疗限制了病毒多样性的增加，治疗前后病毒多样性无统计学差异，抗病毒治疗后早期治疗者病毒多样性较慢性治疗者小(p=0.034)。　　 四、早期治疗对抗病毒治疗后病毒进化的影响　　 1、种系发生构建　　 系统进化树分析结果显示每位患者的序列单独成一簇，无样本间交叉污染及实验室常见毒株的污染。每位患者单独做了无根放射状树，结果显示快速进展早期治疗患者440025和320002治疗前及治疗一年后时间点病毒序列同源性很高，无明显病毒进化的证据，而患者320918感染毒株较复杂未能从进化树判断病毒有无定向进化。慢性期治疗患者多数有明显病毒进化的证据，但患者300121进化树分析未见到明显病毒进化的证据。　　 2、核苷酸及蛋白质序列分析　　 Highlighter分析结果显示，早期治疗成功者440025、320002治疗前后病毒序列无规律点突变存在，无明显病毒进化证据;患者320918治疗前后病毒序列可见有少数突变位点累加及新定向突变的出现。而慢性治疗者治疗后序列与未治疗时序列相比多数存在一定程度的突变位点累积或新的定向同义突变、非同义突变，其突变从少到多依次为300121＜300105＜300185和300202，提示存在一定水平的病毒进化存在。早期治疗者治疗后突变位点累积及新的定向突变出现的频率有较慢性治疗者低的趋势。　　 3、基线与治疗后病毒遗传距离定量分析　　 遗传距离定量分析结果显示3例早期治疗患者net divergence较低，中位值为0.014，而慢性治疗患者除300121外两个时间点均有一定水平的净遗传距离，其中位值为0.339。两组比较显示早期治疗组病毒进化水平有较小的趋势(p=0.077，Mann-Whitney)，但由于样本例数少尚未达到统计学意义。　　 结论:　　 1、MSM人群HIV快速进展者感染早期抗病毒治疗控制病毒储存库大小的效果优于慢性期治疗者，且这种作用不依赖于CD4+T细胞水平。　　 2、MSM人群HIV快速进展者早期治疗前后病毒多样性均小于慢性感染者。　　 3、MSM人群HIV快速进展者感染早期抗病毒治疗后持续病毒进化水平较慢性感染者有较低的趋势。