论文部分内容阅读
目的:探讨皖南蝮蛇抑瘤组分Ⅰ(Agkis-trodon halys venom antitumor componentⅠ,AHVAC-Ⅰ)诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的机制。方法:选择人胃癌细胞SGC-7901做为实验对象,设阴性对照组和不同浓度实验组(5、10、20、30、40μg/m L AHVAC-Ⅰ)处理细胞,通过细胞增殖和毒性检测(Cell Counting Kit-8,CCK-8)实验,检测细胞增殖抑制率,得到AHVAC-Ⅰ的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);根据IC50结果重新实验分组,分别用AHVAC-Ⅰ处理细胞24、48、72h,应用流式细胞技术检测Annexin V-FITC/PI染色及免疫细胞化学技术检测caspase3的表达,苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining简称HE染色法)观察细胞形态学变化,分析AHVAC-Ⅰ是否诱导人胃癌细胞凋亡,设阴性对照组及不同浓度AHVAC-Ⅰ组作用于SGC-7901细胞,检测细胞的活性氧水平、Mn-SOD活性和总抗氧化能力,评估SGC-7901细胞的氧化应激水平;应用Western blot和Real-time PCR实验,检测Bax、Bcl-2等蛋白和基因的表达水平,确定AHVAC-Ⅰ诱导SGC-7901细胞发生凋亡的分子途径。结果:1、不同浓度AHVAC-Ⅰ(5、10、20、30、40μg/m L)处理细胞24h后,CCK-8实验结果显示AHVAC-Ⅰ对SGC-7901细胞生长增殖的抑制作用呈浓度依赖性,根据改良寇氏法计算半数抑制浓度IC50为21.878μg/m L;2、根据IC50结果设置AHVAC-Ⅰ实验浓度(5、10、20μg/m L)和阴性对照孔,处理SGC-7901细胞24h,HE染色观察细胞形态见20μg/m L细胞有显著形态变化,贴壁细胞极少,故流式细胞术及细胞免疫组化设置AHVAC-Ⅰ实验浓度(5、10、20μg/m L)和阴性对照孔检测不同作用浓度和时间时细胞的凋亡情况,结果显示AHVAC-Ⅰ处理SGC-7901细胞24h后细胞凋亡率在AHVAC-Ⅰ浓度为0、5、10、20μg/m L时均随浓度的升高而升高,呈现剂量依赖效应。因此,我们将最高浓度定为20μg/m L。3、SGC-7901细胞经不同浓度AHVAC-Ⅰ(5、10、20μg/m L)处理24h后,活性氧水平、Mn-SOD活性均呈上升趋势,而细胞总抗氧化能力逐渐下降,且呈现剂量依赖效应;4、Western blot和Real-time PCR实验结果显示抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平显著下降,而促凋亡蛋白Bax的表达明显增加。结论:1、AHVAC-Ⅰ可有效抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长增殖;2、AHVAC-Ⅰ可诱导人胃癌细胞SGC-7901发生凋亡,且凋亡率呈现剂量依赖性;3、AHVAC-Ⅰ通过抑制SGC-7901细胞的抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,进而有效激活人胃癌细胞SGC-7901的氧化应激反应,导致SGC-7901细胞发生凋亡。