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目的:观察丙戊酸钠与雷帕霉素对体外培养的多发性骨髓瘤RPMI8226及U266细胞凋亡的影响,初步探讨多发性骨髓细胞中凋亡与自噬的关系,为丙戊酸钠对多发性骨髓瘤的临床治疗提供实验数据。方法:体外培养多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及U266,实验分组:空白对照组,2、4、8mmol/L VPA组,250nmol/L雷帕霉素组,8mmol/L VPA+250nmol/L雷帕霉素联合组。采用流式细胞仪检测VPA及雷帕霉素单用及VPA联合自噬激活剂雷帕霉素作用于RPMI8226和U266细胞株不同时间后的凋亡情况,实时定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)方法检测各实验组凋亡相关因子Bax、Bcl2、Caspase3、Caspase8 mRNA和蛋白的表达情况。结果:1流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示:2、4、8mmol/L的VPA处理RPMI8226细胞株后的凋亡情况分别为4.33±0.37%,17.35±0.59%,30.11±0.76%;而U266细胞的凋亡情况分别为5.17±0.71%,25.53±0.59%,38.33±2.11%。48h不同浓度VPA处理多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226与U266,随着VPA浓度的增加RPMI8226和U266细胞的凋亡率逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05)。8mmol/L的VPA处理MM细胞株RPMI8226及U266细胞不同时间(0h、12h、24h、48h)凋亡情况,RPMI8226细胞的凋亡率分别为1.68±0.32%,9.93±0.47%,15.51±0.62%,30.11±0.76%;U266细胞的凋亡率分别为2.27±0.27%,13.14±2.18%,25.76±1.83%,38.33±2.31%。随着VPA处理时间的延长,RPMI8226和U266细胞的凋亡率逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05)。不同实验组RPMI8226细胞48h后的凋亡情况:空白对照组:4.43±0.30%、VPA组:30.11±0.76%、雷帕霉素组:25.36±0.68%、VPA+雷帕霉素组:43.51±0.71%。不同实验组U266细胞48h后的凋亡情况:空白对照组:5.66±0.80%、VPA组:38.33±2.11%、雷帕霉素组:22.72±2.61%、VPA+雷帕霉素组:44.68±3.32%。VPA、雷帕霉素与联合用药组与空白对照组相比凋亡率增加,联合用药组凋亡更显著。2由流式细胞仪结果可知VPA能够促进MM细胞凋亡,且促凋亡作用具有浓度及时间依赖性,VPA与雷帕霉素在促进MM细胞凋亡之间具有协同作用,那么VPA与雷帕霉素对多发性骨髓瘤细胞的凋亡影响在基因与蛋白水平是如何变化的,我们采用实时定量荧光PCR与western blot方法检测凋亡相关因子Bax、Bcl2、Caspase3、Caspase8 mRNA与蛋白表达的变化,结果显示8mmol/L VPA处理RPMI8226与U266细胞不同的时间(12h、24h、48h)后,与空白对照相比,Bax、Caspase3、Caspase8 mRNA及蛋白的表达随着VPA处理时间的延长表达量逐渐增加,Bcl2 mRNA及蛋白的表达量逐渐减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。进一步分析雷帕霉素与VPA单用及联合应用对多发性骨髓瘤细胞的凋亡影响在基因与蛋白水平的变化。结果显示:VPA单药组与雷帕霉素单药组,与空白对照组相比,凋亡相关因子Bax、caspase3、caspase8 mRNA及蛋白的表达量增加,bcl2 mRNA及蛋白的表达量减少,差异具有统计学意义,且VPA与雷帕霉素联合组促凋亡因子Bax、caspase3、caspase8的表达显著增加,抑凋亡因子bcl2的表达显著减低。结论:1 VPA能够促进多发性骨髓瘤凋亡,且呈浓度-时间依赖性。2 VPA与雷帕霉素联合后促凋亡因子Bax、caspase3、caspase8的表达量明显增加,抑凋亡因子bcl2的表达量明显减少。3 VPA与雷帕霉素在促进多发性骨髓瘤RPMI8226及U266细胞凋亡之间具有协同作用。