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苍术为芳香化湿类中药。研究发现苍术及其有效成分具有抗氧化和抗炎等药理作用。苍术为君药的二妙丸类方常用于治疗下焦湿热,具有肾保护作用,但苍术肾保护机制尚需进一步阐明。本论文将初步分析苍术水提物成分,基于其网络药理学研究,以期发现苍术肾保护可能作用途径及有效成分的线索,并从肾小球足细胞保护角度探索可能的分子作用机制。本文将苍术水提物依次经石油醚、乙酸乙酯、及正丁醇萃取,对各萃取相及萃取后的水相进行液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析,结合高效液相色谱（HPLC）分析结果,初步确定苍术水提物可能含有苍术素等36种成分。基于成分分析结果,进行其网络药理学研究,预测结果提示苍术可能改善肾脏氧化应激。临床和实验研究结果表明,长期高果糖饮食可诱导肾功能障碍。课题组前期研究观察到果糖喂养大鼠肾脏高水平过氧化氢（H2O2）和超氧阴离子（O2-）等氧化应激、肾小球足细胞足突融合与蛋白尿现象。而活性氧（ROS）和H2O2可激活瞬时受体电位阳离子通道6（TRPC6）,上调细胞内Ca2+水平。足细胞裂孔隔膜重要分子Synaptopodin通过调控小G蛋白家族Ras相关C3肉毒菌毒物底物（Rho A）和细胞分裂周期蛋白42（Cdc42）而稳定足细胞应力纤维,并抑制丝状伪足的形成以防止足细胞过度迁移。足细胞运动失衡将促进其足突融合及裂孔隔膜破坏。有学者在阿霉素诱导动物肾病模型和脂多糖（LPS）诱导足细胞损伤模型中观察到钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶4（CaMK4）高表达及Synaptopodin降解,从而加剧足细胞迁移。为此,本论文将研究果糖诱导的氧化应激是否促进足细胞迁移?以及TRPC6-Ca2+-CaMK4-Synaptopodin信号在其中的介导作用。本论文在课题组已建立的10%果糖饮用水喂养大鼠肾病模型上着重研究苍术水提物减轻肾小球足细胞损伤的作用。苍术水提物（720和1090 mg/kg）或别嘌呤醇（5 mg/kg）口服给予模型大鼠9周后,能改善动物胰岛素抵抗,降低血清尿酸、肌酐和尿素氮水平,以及尿液白蛋白/肌酐比值;降低肾皮质H2O2和丙二醛（MDA）水平,增强超氧化物歧化酶（SOD）活性;并提高肾小球过氧化氢酶（CAT）和SOD1蛋白水平,上调足细胞标志性蛋白podocin和nephrin及细胞骨架蛋白α-Actinin-4、CD2AP和Synaptopodin蛋白水平,这些结果与其减轻肾小球基底膜增厚和足细胞足突融合的实验结果一致。进一步研究发现,苍术水提物和别嘌呤醇可显著下调果糖模型大鼠肾小球TRPC6和p-CaMK4蛋白表达,上调Synaptopodin蛋白水平。这些研究结果提示苍术可能通过抑制果糖诱导的氧化应激而改善肾小球足细胞损伤,其保护机制可能与调控TRPC6-CaMK4-Synaptopodin信号相关。苍术主要成分苍术素具有抗氧化作用。本文将进一步研究苍术素能否通过抗氧化而抑制果糖诱导的足细胞过度迁移。使用5 m M果糖刺激体外培养的足细胞（24 h）,观察到足细胞迁移增强。苍术素（20、40和80μΜ）或别嘌呤醇（100μΜ）干预后可减少果糖模型组足细胞的过度迁移和胞内ROS水平,恢复足细胞F-actin肌动蛋白的表达,上调podocin、nephrin、α-Actinin-4、CD2AP和Synaptopodin蛋白水平,下调TRPC6和p-CaMK4蛋白表达。这些研究结果提示苍术素可能抑制果糖诱导氧化应激而防止足细胞过度迁移,减轻足细胞损伤,其保护机制可能与调控钙信号相关。为进一步探究果糖是否通过氧化应激促进足细胞过度迁移?以及TRPC6和CaMK4在其中的调控作用,本文分别使用CaMK4 si RNA、TRPC6 si RNA和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预足细胞。结果发现CaMK4 si RNA、及CaMK4si RNA联用苍术素或别嘌呤醇上调模型组足细胞Synaptopodin蛋白水平,抑制足细胞过度迁移;TRPC6 si RNA、及TRPC6 si RNA与苍术素或别嘌呤醇联用后,下调模型组足细胞胞内Ca2+水平和p-CaMK4蛋白水平,恢复Synaptopodin蛋白表达,有效抑制模型组足细胞过度迁移,提示果糖激活TRPC6通道诱导Ca2+内流而磷酸化CaMK4促进Synaptopodin降解,进而促进足细胞迁移。NAC、及NAC联用苍术素或别嘌呤醇可抑制模型组足细胞过度迁移,下调TRPC6和p-CaMK4蛋白表达,并降低胞内Ca2+水平,提示果糖通过氧化应激激活TRPC6通道从而促进足细胞迁移。这些研究结果表明果糖通过氧化应激活化TRPC6-Ca2+-CaMK4-Synaptopodin信号促进足细胞过度迁移;而苍术素可能通过抗氧化调节TRPC6-Ca2+-CaMK4-Synaptopodin信号,降低果糖诱导的足细胞过度迁移。小结:本文发现了果糖诱导大鼠肾小球足细胞损伤的新途径:通过氧化应激激活TRPC6-CaMK4-Synaptopodin信号诱导肾小球足细胞损伤。苍术水提物可改善果糖诱导大鼠肾小球足细胞损伤,其保护机制可能为通过抗氧化调节TRPC6-CaMK4-Synaptopodin信号。进一步研究发现,苍术有效成分苍术素可能通过抗氧化调节TRPC6-Ca2+-CaMK4-Synaptopodin信号抑制果糖诱导足细胞过度迁移。这些工作为苍术临床防治高果糖饮食引发肾损伤提供了实验基础。